Reactivos de disociación

La tripsina y el EDTA se utilizan comúnmente juntos para disociar células adherentes en cultivos celulares. Aquí está cómo funciona cada uno:

Tripsina es una enzima proteolítica que descompone las proteínas. Específicamente, escinde los enlaces peptídicos en el lado carboxilo de los aminoácidos lisina y arginina. Cuando se aplica a un cultivo celular, la tripsina digiere las proteínas que median la adhesión célula-célula y célula-matriz, desprendiendo eficazmente las células del recipiente de cultivo y entre sí.

EDTA (ácido etilendiaminotetraacético) es un agente quelante que se une a iones metálicos divalentes como el calcio y el magnesio. Estos iones metálicos son esenciales para la función de las moléculas de adhesión celular (CAMs) como las integrinas y las cadherinas. Al quelar estos iones, el EDTA interrumpe las CAMs, debilitando las interacciones célula-célula y célula-matriz y aumentando la efectividad de la tripsina.

El EDTA se utiliza a menudo junto con la tripsina en una solución de tripsina-EDTA. El EDTA primero debilita la adhesión celular al quelar los iones de calcio y magnesio, y luego la tripsina descompone aún más las proteínas de adhesión, facilitando una disociación celular eficiente. El uso de tripsina y EDTA juntos asegura una disociación efectiva y suave de las células adherentes, minimizando el daño y manteniendo la viabilidad celular.

Al seleccionar reactivos de disociación para cultivos celulares o disociación de tejidos, considere lo siguiente:

1. Diferentes tipos de células y tejidos tienen sensibilidades y composiciones estructurales variadas. Elija reactivos apropiados para el tipo específico de célula o tejido con el que está trabajando.
2. Asegúrese de que el proceso de disociación preserve la viabilidad y funcionalidad de las células. Algunos reactivos pueden ser demasiado agresivos para ciertas células, afectando su crecimiento o comportamiento posterior.
3. Evalúe la efectividad del reactivo en la disociación de células dentro de un marco de tiempo razonable. Una disociación ineficiente puede llevar a una exposición prolongada, lo que podría dañar las células.
4. Considere cómo el reactivo de disociación podría afectar los experimentos o aplicaciones posteriores. Algunos reactivos pueden dejar residuos o alterar los marcadores de superficie celular, impactando los procesos posteriores como la citometría de flujo, la clasificación celular o los ensayos moleculares.
5. Evalúe la seguridad y facilidad de manejo del reactivo. Algunos reactivos pueden ser tóxicos o requerir precauciones específicas de manejo. Asegúrese de que existan protocolos adecuados para su uso seguro.