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Invitrogen™ Vybrant™ FLICA Caspase Apoptosis Assay Kits for flow cytometry

Detecte apoptosis mediante citometría de flujo con ensayos de caspasa Vybrant FLICA que detectan actividades de policaspasas y caspasas 3/7/8.

Marca:  Invitrogen™ V35118

Detalles adicionales : Peso : 0.00525kg Transport : UN number : 3316 Chem class : 9 Pack group : III

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Código de producto. 10003352

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Descripción

Descripción

Detecte rápidamente la apoptosis mediada por caspasa mediante citometría de flujo con kits de ensayo de caspasa Vybrant FAM para policaspasas y caspasas 3 y 7.Los kits de ensayo de caspasa Vybrant FAM utilizan la metodología de inhibidor fluorescente de caspasas (FLICA) para detectar y registrar la actividad de la caspasa.Específicamente, estos kits de ensayo de caspasa contienen sustratos FLICA modificados mediante ingeniería FAM-VAD-FMK (para policaspasas), FAM-DEVD-FMK (para caspasa-3/7) y FAM-LETD-FMK (para caspasa-8).También incluyen tinciones Hoechst 33342 y de yoduro de propidio, lo que permite la evaluación simultánea de la permeabilidad de la membrana y el ciclo celular mediante citometría de flujo.

Los kits de ensayo de caspasa Vybrant FAM para citometría de flujo emplean un novedoso enfoque para la detección de caspasas activas: los kits aprovechan la metodología FLICA, que es una etiqueta de afinidad. Esta etiqueta de afinidad asocia una fracción de la fluorometilcetona (FMK), que puede reaccionar covalentemente con una cisteína, con una secuencia de aminoácidos específica de la caspasa. Se utilizan diferentes secuencias de reconocimiento de aminoácidos para detectar diferentes caspasas: ácido valina-alanina-aspártico (VAD) para las policaspasas (incluidas las caspasas-1, -3, -4, -5, -6, -7, -8 y -9), ácido aspártico-ácido glutámico-ácido valina-aspártico (DEVD) para caspasa-3/7 y leucina-ácido glutámico-treonina-ácido aspártico (LETD) para caspasa-8. Se incluye un grupo de carboxifluoresceína (FAM) como indicador.

Se considera que el reactivo FLICA interactúa con el centro de reacción enzimática de una caspasa activada a través de la secuencia de reconocimiento, y luego se acopla covalentemente a través de la fragmentación de la FMK. El inhibidor del FLICA es permeable en células y no citotóxico. Las moléculas FLICA no enlazadas se disipan fuera de la célula y se lavan; la señal fluorescente restante es una medida directa de la cantidad de caspasa activa que estaba presente en el momento en que se agregó el inhibidor. Los picos aproximados de excitación y emisión de los reactivos FLICA, yoduro de propidio y Hoechst 33342 son de 488 nm/⁄530 nm, 535 nm/⁄6617 nm y 350 nm/⁄461 nm, respectivamente. Los reactivos de detección incluidos en los kits de ensayo de policaspasas Vybrant FAM, ensayo de caspasas 3 y 7 y apoptosis de ensayo de caspasa 8 son 488⁄⁄530 FAM-VAD-FMK, 488/⁄530 FAM-DEVD-FMK y 488/⁄530 FAM-LETD-FMK, respectivamente.
Especificaciones

Especificaciones

Kit de ensayo de caspasa 3 y 7 Vybrant FAM
Un vial de reactivo de caspasa-3 y -7 FAM-DEVD-FMK (reactivo FLICA, sólido liofilizado), un vial de Hoechst 33342 (400 µl, 1 mm en agua), un vial de PI (1 ml, 250 µg/ml en agua), un vial de DMSO (0,5 ml), un frasco de solución fijadora de apoptosis (formaldehído al 10 % con metanol en PBS, 6 ml) y un frasco de tampón de lavado de apoptosis 10x.
UV, 488
Temperatura ambiente
Fluorescente
FAM, Hoechst 33342, yoduro de propidio
Almacenar en el refrigerador (2–8 °C) y proteger de la luz.
Tubo
Kit de ensayo de caspasa
FAM-DEVD-FMD:388/530
PI:535/617
Hoechst 33342:350/461
Vybrant
Citómetro de flujo
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