Invitrogen™ Kit de ADN de donante TrueTag™, RFP

Descripción

El kit de ADN de donante TrueTag, RFP, proporciona una solución rápida para impulsar el marcado de genes de alta eficiencia (hasta un 100 % de células editadas) con ADN de donantes listo para transfección para experimentos de edición de genoma.

Entre los beneficios del kit de ADN de donante TrueTag se incluyen:

• Se requiere una amplificación de la PCR de un paso para generar plantillas de donantes—no requiere clonación
• Genere donantes de ADN listos para transfección en horas en lugar de días
• Enriquezca hasta el 100 % de las células etiquetadas con GFP

El kit de ADN de donante TrueTag, RFP, proporciona todo lo necesario para producir un donante de ADN de alta calidad para etiquetar genes con un marcador de selección y GFP. Basta con proporcionar dos cebadores específicos de locus para añadir brazos de homología, amplificar mediante PCR y purificar para obtener un donante listo para la transfección en horas, no en días. Cada kit está diseñado para permitir a los usuarios:

• Etiquetar el terminal carboxi- (C-) o amino- (N-) de su gen de interés
• Elegir entre marcadores de selección de puromicina o blasticidina—lo que mejor se adapte al modelo celular
• Eliminar fácilmente los marcadores de resistencia antibiótica con Cre/Lox después del enriquecimiento celular

El kit incluye

• Cuatro plantillas de donantes lineales: Resistencia a N-terminal/puromicina, resistencia a N-terminal/blasticidina, resistencia a C-terminal/puromicina, resistencia a C-terminal/blasticidina
• Mezcla maestra de PCR de alta fidelidad Phusion Flash
• Columnas y tampones de limpieza de PCR
• Cebadores de control positivo para etiquetar la beta-actina humana (ACTB)

Software intuitivo para diseñar rápidamente reactivos específicos de genes

Los reactivos de edición de genes específicos de dianas son necesarios para una adecuada inserción génica de la etiqueta fluorescente. El software basado en web TrueDesign Genome de Invitrogen se ha creado específicamente para:

• Identificar la transcripción del gen diana
• Designar el sitio de inserción
• Diseñar y facilitar el pedido de todos los componentes necesarios

Reactivos necesarios disponibles a través del software de diseño TrueDesign (no incluidos en el kit)

• ARN guía CRISPR o TALEN diseñados junto a N- o C-terminal
• Oligos para amplificar la PCR de su donante y añadir los brazos de homología adecuados
• Cebadores de secuenciación para la evaluación de la eficacia de la disociación CRISPR-Cas9
• Cebadores de verificación para validar la inserción correcta del donante de ADN TrueTag

También necesarios y disponibles para su compra por separado o como parte del flujo de trabajo de TrueDesign

• Proteína TrueCut Cas9 v2, proteína TrueCut HiFi Cas9 o ARNm GeneArt CRISPR
• Reactivo de transfección CRISPRMAX o reactivo de transfección MessengerMAX