Invitrogen™ Oligonucleótidos de transcripción inversa con cambio de plantilla

Descripción

Este conjunto de oligonucleótidos está diseñado para la reacción de transcripción inversa con cambio de plantilla y la posterior preamplificación del ADNc obtenido. El oligonucleótido de cambio de plantilla (TSO) y el oligonucleótido de captura (dT) se utilizan durante la reacción de síntesis de ADNc para incorporar secuencias adaptadoras en ambos extremos del ADNc de longitud completa. El cebador de preamplificación es complementario a la secuencia del adaptador y permite la amplificación por PCR del ADNc obtenido.

El oligonucleótido de cambio de plantilla (TSO) y el cebador de captura de oligonucleótidos (dT) están diseñados para su uso en la reacción de transcripción inversa de cambio de molde. El oligonucleótido de captura que contiene oligo (dT) y secuencias adaptadoras se utiliza como cebador para la síntesis selectiva de ADNc de primera cadena a partir de ARN que contienen poli(A). Cuando la transcriptasa inversa alcanza el extremo 5ʹ de la plantilla de ARN, la actividad de desoxinucleotidil transferasa terminal (TdT) de la transcriptasa inversa agrega 1–3 nucleótidos adicionales en el extremo del ADNc, lo que permite la hibridación del oligonucleótido de cambio de plantilla y la incorporación sin ligadura de la secuencia adaptadora al extremo 3ʹ del ADNc resultante. Ambos oligos se suministran como soluciones concentradas 20X listas para usar. Para obtener la máxima eficacia en el cambio de plantilla, recomendamos utilizar oligonucleótido de cambio de plantilla y cebador de captura de oligonucleótidos (dT) con Invitrogen SuperScript IV Template Switching RT Master Mix.

Las secuencias adaptadoras incorporadas en ambos extremos del ADNc pueden servir como sitios de unión de cebadores en el posterior paso de amplificación por PCR, permitiendo la preamplificación global de plantillas de longitud completa. Para la PCR, utilice el cebador de preamplificación, que es complementario a el TSO y la secuencia del adaptador de captura de oligo (dT) que se suministra como solución concentrada 100X lista para usar.

Los cebadores TSO, de captura de oligonucleótidos (dT) y Preamplification también están disponibles como parte del kit completo Invitrogen SuperScript IV Single Cell/Low Input cDNA PreAmp (N.º de cat. 11752048).

Aplicaciones
• Síntesis de ADNc
• Preamplificación de ADNc
• Sec. de ARN
• RACE