Thermo Scientific™ TMTduplex™ Isobaric Mass Tagging Kit

Descripción

Los kits y reactivos de etiquetado de masas isobáricas Thermo Scientific™ TMT reactivos a aminas permiten el etiquetado cuantitativo de proteínas extraídas de células y tejidos para su identificación y análisis mediante espectrometría de masas.

Los cambios en la expresión de las proteínas y las modificaciones postraslacionales son mecanismos esenciales de regulación biológica y de enfermedad. Los avances en la instrumentación de espectrometría de masas (MS), la bioinformática y los métodos de cuantificación, como la cuantificación sin etiquetas, el etiquetado metabólico y el etiquetado químico, permiten a los investigadores identificar y analizar cuantitativamente miles de proteínas en una muestra dada con un alto grado de precisión.^{1, 2}

Las etiquetas químicas isobáricas son una potente herramienta que permite la identificación y cuantificación simultáneas de proteínas en diversas muestras mediante espectrometría de masas en tándem. Se trata de pequeñas moléculas químicas de estructura idéntica que realizan una unión covalente a los aminoterminales libres de residuos lisina de péptidos y proteínas, con lo que etiquetan varios péptidos de una muestra determinada. Durante el análisis de MS/MS, cada etiqueta isobárica produce una firma de ion marcador única que hace posible la cuantificación. En un análisis de MS típico, los péptidos etiquetados se distinguen entre sí. Sin embargo, en el modo MS tándem durante el cual los péptidos se aíslan y fragmentan, cada etiqueta genera un ion marcador único. La cuantificación de proteínas se logra comparando las intensidades de los seis iones marcadores en los espectros de MS/MS.

Características destacadas:

• Permite la identificación y cuantificación de proteínas a partir de múltiples muestras de células, tejidos o fluidos biológicos. Proporciona resultados químicos coherentes que permiten una transición eficaz del desarrollo del método a la cuantificación multiplex, lo que posibilita la investigación y detección de biomarcadores.
• Etiquetado eficaz de la membrana y de las proteínas modificadas postraslacionalmente. Sistema ampliable que permite el multiplexing simultáneo de hasta a seis muestras diferentes en un solo experimento.
• Fragmentación optimizada y cuantificación totalmente compatible con Proteome Discoverer 1.0 para todas las plataformas Thermo Scientific LC MS/MS, como los sistemas LTQ XL y LTQ Orbitrap XL
• Cada etiqueta TMT se basa en la misma estructura química, lo que elimina la necesidad de modificar las condiciones de etiquetado o las condiciones de separación de HPLC entre experimentos

Las etiquetas se componen de sets de TMT₀, el set de 2-Plex TMT₂ y el set de 6-Plex TMT₆.

• La etiqueta TMT₀ permite realizar pruebas y optimizar la preparación, el etiquetado, el fraccionamiento y la fragmentación mediante MS de las muestras para identificar péptidos y detectar indicadores sin necesidad de utilizar los compuestos etiquetados isotópicos más costosos.
• El set de reactivos TMT₂ permite la creación de perfiles de proteínas de 2-Plex para estudios pequeños.
• El set de reactivos TMT₆ permite la creación de perfiles de proteínas de 6-Plex en distintas condiciones, como ciclos de tiempo, respuestas a dosis, réplicas o comparaciones de varias muestras.

Recomendada para:

• Perfil de expresión de proteínas de estados normal frente a estado con enfermedad o de control frente a tratado
• Análisis cuantitativo de proteínas para las que no hay anticuerpos disponibles
• Identificación y cuantificación de membranas y proteínas modificadas después de la traslación