Invitrogen™ LanthaScreen™ TR-FRET PPAR gamma Competitive Binding Assay Kit, goat

Este kit contiene anticuerpo TB-Anti-GST de cabra; los otros componentes del kit son los mismos que los del kit A15145:

el ensayo de unión competitiva LanthaScreen™ TR-FRET PPAR gamma ofrece un método sensible y robusto para la detección de alto rendimiento (HTS) de ligandos para el receptor gamma activado por el proliferador de peroxisomas (PPAR gamma). El kit utiliza un anticuerpo anti-GST marcado con terbio, un ligando pan-PPAR fluorescente de molécula pequeña (Fluormone™ Pan-PPAR verde) y un dominio humano de ligando gamma PPAR (LBD) marcado con glutatión S-transferasa (GST) en un formato de ensayo homogéneo de mezcla y lectura.

Para el ensayo:
al llevar a cabo el ensayo de unión competitiva LanthaScreen™ TR-FRET PPAR gamma, se añade Fluormone™ Pan-PPAR verde a los compuestos de prueba de ligando, seguido de la adición de una mezcla del anticuerpo PPAR gamma-LBD y anti-GST con terbio. Cuando el Fluormone™ Pan-PPAR verde está unido a PPAR gamma, se produce la transferencia de energía del anticuerpo marcado con terbio al trazador y se observa una alta relación TR-FRET. El ligando competitivo que se une a PPAR gamma se detecta mediante una prueba que compara la capacidad del compuesto de desplazar el trazador, lo que resulta en una pérdida de FRET entre el anticuerpo y el trazador. Después de un periodo de incubación a temperatura ambiente, se calcula la relación TR-FRET de 520 Nm/495 Nm y se puede utilizar para determinar la IC50 a partir de una curva dosis-respuesta del compuesto (figura 1). Este tipo de ensayo de unión es análogo a los ensayos basados en radioligandos, a excepción de que elimina la manipulación del material radioactivo y permite un formato homogéneo solo de adición.