Thermo Scientific™ Módulo de preparación de muestras para IP y MS SureQuant™ AKT Pathway (Fosfo)

Descripción

Los módulos de cuantificación SureQuant contienen 30 péptidos únicos de 10 proteínas objetivo de la vía de señalización AKT-mTOR para la cuantificación multiplexada de péptidos únicos mediante LC y MS. Los kits SureQuant utilizan inmunoprecipitación multiplex junto con espectrometría de masas para el enriquecimiento y la cuantificación simultáneos de proteínas objetivo en la vía de señalización de AKT/mTOR. Cada panel multiplex contiene dos módulos: 1) el módulo de preparación de muestras IP y MS, que incluye todos los reactivos necesarios para inmunoenriquecer las proteínas objetivo con la posterior preparación de muestras MS en solución, y 2) un módulo de cuantificación absoluta o relativa, que incluye un estándar de idoneidad del sistema, y mezclas HeavyPeptide™ y LightPeptide™ AQUA Ultimate

Para la cuantificación relativa, se proporciona una mezcla de HeavyPeptide AQUA Ultimate para usar como estándar interno añadido en la muestra multiplexada. Para la cuantificación absoluta, las mezclas HeavyPeptide y LightPeptide AQUA Ultimate se proporcionan con la digestión de proteínas Pierce™ 6 y se utilizan para generar una curva estándar en una matriz. El estándar de idoneidad del sistema Pierce™ LC-MS/MS (mezcla de 7 x 5) se incluye en ambos módulos para evaluar el intervalo dinámico de los sistemas LC-MS/MS antes de ejecutar las curvas de calibración y las muestras.

El módulo de preparación de muestras IP y MS permite IP y co-IP de antígenos altamente efectivos para el análisis de MS. Primero, las células se lisan y se incuban con una mezcla de anticuerpos biotinilados verificada por IPMS. El complejo anticuerpo–antígeno se captura en partículas magnéticas de estreptavidina compatibles con MS, y las proteínas no específicas se eliminan mediante el lavado con tampones compatibles con MS. Las proteínas objetivo se eluyen mediante tripsina y son compatibles con la preparación de muestras de MS. La preparación de muestras de MS se ha simplificado para que se complete en 4 horas, de modo que MS pueda analizar la muestra el mismo día.

La vía de señalización de AKT/mTOR sirve como vía reguladora maestra para el crecimiento y la proliferación celular, y desempeña un papel fundamental en la cascada de señalización. La activación aberrante de esta vía promueve la supervivencia de las células tumorales en muchos tipos de cáncer. Los kits SureQuant son ideales para controlar los niveles de expresión, las isoformas y el estado de fosforilación de AKT/mTOR en un solo ensayo. La habilidad para supervisar y cuantificar en una muestra simple la convierte en una herramienta poderosa para la evaluación del crecimiento celular normal o anormal.

Los paneles multiplex de vía AKT SureQuant son:
• Completo:incluye todos los reactivos para una vigilancia satisfactoria del rendimiento del sistema de MS, la preparación de muestras y la cuantificación absoluta de proteínas/péptidos objetivo
• Validado: los anticuerpos, péptidos y lisados de control se han probado rigurosamente para determinar con éxito la especificidad y la cuantificación de cada péptido objetivo
• Multiplex: capaz de cuantificar diferentes objetivos de la vía AKT/mTOR, RAS e isoformas p53
• Flexible: el formato modular permite el inmunoenriquecimiento solo o en combinación con la cuantificación relativa o absoluta