Invitrogen™ GeneArt™ Seamless PLUS Cloning and Assembly Kit

Descripción

Al igual que nuestra primera generación de kits de clonación y ensamble Seamless, los kits de clonación y ensamble GeneArt™ Seamless PLUS sirven para la clonación simultánea y direccional de 1 a 4 fragmentos de PCR (reacción en cadena de la polimerasa) en cualquier orden, en cualquier vector linealizado y en una sola reacción de 30 minutos o menos a temperatura ambiente. Sin embargo, Seamless PLUS ofrece varias ventajas con respecto a los kits anteriores:

• Mayor eficacia: opción de preclonación para fragmentos grandes para una mayor eficiencia de clonación
• Construcciones más grandes: cree construcciones de hasta 40 kb
• Versatilidad: vector conjugativo de alta capacidad y amplio intervalo que se replica en la mayoría de las bacterias gramnegativas

Las mejoras anteriores se combinan con estos beneficios clave que comparten todos los kits de clonación y ensamble GeneArt™ Seamless:

• Velocidad y facilidad: clone hasta 4 fragmentos de ADN, con la secuencia de su elección, de forma simultánea en un solo vector; no requiere digestión de restricción, ligadura o sitios de recombinación
• Precisión y eficacia: diseñado para permitirle clonar lo que desee, donde desee, en la orientación que desee y lograr hasta un 90 % de clones correctos sin dejar secuencias adicionales
• Herramientas gratuitas: diseñe su construcción final y oligonucleótidos de ADN en sílice utilizando nuestra herramienta basada en la web que le guiará paso a paso por su proyecto
• Flexibilidad de vectores:use nuestro vector lineal o un vector de su elección
• Diversas aplicaciones: agilice muchas técnicas de biología sintética y biología molecular mediante la rápida combinación, adición, eliminación o intercambio de segmentos de ADN

Para la clonación de más de 4 fragmentos de ADN o para moléculas finales mayores de 110 Kb, considere el sistema de ensamble genético GeneArt™ High-Order.

Creación simple y rápida de clones
La clonación GeneArt™ Seamless PLUS es un proceso sencillo, de dos pasos, que consiste en el ensamble in vitro seguido por la transformación en E. coli T1R SA competente One Shot™ DH10B™. El kit emplea una mezcla de enzimas/tampones patentada para ensamblar fragmentos de ADN con homología terminal compartida sin secuencias ni cicatrices adicionales en la construcción final (“seamless”). La homología terminal se incorpora fácilmente mediante la amplificación de PCR con oligonucleótidos de ADN personalizados diseñados mediante nuestra herramienta web gratuita.

Eficacia, flexibilidad y precisión de la clonación
Con el kit de clonación y ensamble GeneArt™ Seamless PLUS los principales factores que influyen en la eficacia de la clonación son el tamaño de los fragmentos de ADN (100 bp a 10 Kb), el tamaño total de la molécula final (≤ 40 Kb), y la calidad y especificidad de cada fragmento.

Eficacia típica de la clonación para diversas cantidades de fragmentos:

• > 95 % para 4 fragmentos de 5 Kb cada uno
• > 90 % para 4 fragmentos de 10 Kb cada uno

El éxito de la clonación es independiente de la secuencia de inserción y el tipo de vector, lo que permite diseñar y añadir casi cualquier secuencia o combinación de secuencias a cualquier plásmido, siempre que se pueda linealizar por digestión de enzimas de restricción o PCR. Los clones circulares obtenidos a partir de la reacción contienen solo la secuencia de su vector original, insertos y las homologías correspondientes originales, sin inserciones de nucleótidos extraños.

Soporte para clonación en sílice
Un paso clave en la clonación GeneArt™ Seamless PLUS es el diseño correcto de fragmentos y oligonucleótidos con la homología y el espaciado apropiados para ayudar a asegurar el ensamble exitoso de su clon. Proporcionamos una herramienta en línea gratuita, la herramienta de diseño GeneArt™ para ensamble y mutagénesis Seamless o High-Order,para ayudarle a diseñar su experimento en sílice. La herramienta comprueba la compatibilidad del diseño experimental con las especificaciones del producto, diseña oligonucleótidos de ADN con homología final para la amplificación PCR de los diferentes elementos a clonar y presenta al usuario una representación gráfica del vector, así como una secuencia anotada descargable en formato GenBank, compatible con el software Vector NTI™.

Aplicaciones
El kit de clonación y ensamble GeneArt™ Seamless PLUS está diseñado para potenciar la clonación y el ensamble de ADN en una amplia gama de aplicaciones de biología molecular y biología sintética, entre otras. El producto permite la creación de vectores de expresión modulares, con piezas intercambiables, y se puede utilizar para realizar una variedad de tareas que de otro modo requerirían múltiples pasos. Utilice la mezcla para construir proteínas de fusión; eliminar, reemplazar o agregar elementos de ADN, como emplazamientos de restricción existentes en un vector y llevar a cabo otras muchas técnicas que requieren la manipulación de secuencias genéticas.