Productos para el aislamiento y purificación de ARN

La aislamiento y purificación de ARN son pasos cruciales en biología molecular para estudiar la expresión génica, secuenciar ARN o realizar otras aplicaciones posteriores. Algunos métodos comunes utilizados para la aislamiento y purificación de ARN son:

• Extracción con fenol-cloroformo (reactivo TRIzol): Utiliza fenol y cloroformo para separar el ARN de otros componentes celulares
• Purificación en columna basada en membrana de sílice: Utiliza columnas de centrifugación con membranas de sílice para unir y eluír el ARN
• Purificación basada en perlas magnéticas: Emplea perlas magnéticas recubiertas con moléculas de unión al ARN para alto rendimiento y automatización
• Ultracentrifugación en gradiente de cloruro de cesio: Separa el ARN en función de la densidad mediante ultracentrifugación

Selección de Poly(A):

• Cromatografía en celulosa Oligo(dT): Aísla el ARNm por unión a su cola poly(A)
• Perlas magnéticas Oligo(dT): Similar a la cromatografía en celulosa pero utiliza perlas magnéticas
• Precipitación con cloruro de litio: Precipita selectivamente ARN de alto peso molecular
• Digestión enzimática (tratamiento con DNasa): Elimina la contaminación de ADN digiriendo el ADN con DNasa

Cada uno de estos métodos tiene sus ventajas y desventajas en términos de rendimiento, pureza, simplicidad y adecuación para diferentes tipos de muestras y aplicaciones posteriores. La elección del método a menudo depende de los requisitos específicos del experimento y del tipo de muestra que se está procesando.

Evitar la contaminación por ADN durante la aislamiento de ARN es crucial para garantizar la pureza de la muestra de ARN. Aquí hay varias estrategias para minimizar la contaminación por ADN:

1. Después de aislar el ARN, trate la muestra con DNasa para degradar cualquier ADN restante. Hay kits comerciales de DNasa libres de ARNasa disponibles para este propósito.
2. Utilice agentes desnaturalizantes fuertes como el tiocianato de guanidinio durante el paso de lisis celular. Estos agentes ayudan a desnaturalizar las proteínas, incluidas las nucleasas que podrían degradar el ARN.
3. Trabaje en un entorno limpio y utilice equipos y reactivos estériles y libres de ARNasa. Evite la contaminación cruzada cambiando los guantes con frecuencia y utilizando pipetas y puntas dedicadas.
4. Siga protocolos que incluyan pasos para precipitar selectivamente el ARN mientras se lava el ADN. Los pasos de precipitación con etanol e isopropanol pueden ayudar a purificar el ARN.
5. Los kits comerciales de aislamiento de ARN están diseñados para minimizar la contaminación por ADN. Estos kits suelen incluir pasos para la unión y el lavado selectivo del ARN.
6. Al utilizar métodos de aislamiento basados en columnas, no sobrecargue las columnas con demasiada muestra, ya que esto puede llevar a una eliminación incompleta del ADN.
7. Ocasionalmente realice aislamientos simulados (sin muestras) para asegurarse de que sus reactivos y equipos no estén contaminados con ADN.
8. Después del aislamiento, verifique la contaminación por ADN utilizando la PCR dirigida a una secuencia de ADN específica. Si ocurre amplificación, indica la presencia de contaminación por ADN.

Siguiendo estos pasos, puede reducir significativamente el riesgo de contaminación por ADN en sus muestras de ARN.