Thermo Scientific™ Tryptic Digestion Kits

Descripción

La identificación y análisis precisos de proteínas es un componente central de las estrategias proteómicas para el estudio de las funciones y los procesos celulares. Mediante la espectrometría de masas, se pueden identificar con precisión las proteínas y las modificaciones postraslacionales pertinentes, pero el método depende en gran medida de la calidad de la preparación de la muestra. Los kits de digestión Thermo Scientific Pierce proporcionan enzimas y reactivos para una digestión y guanidinación eficaces y reproducibles para mejorar la ionización de fragmentos de péptidos.

La preparación de muestras es uno de los pasos más variables y lentos en el análisis de proteínas por MS, y la calidad y reproducibilidad de la extracción y preparación de muestras afectan significativamente a los resultados. Ocasionalmente, se requieren pasos adicionales para mejorar la calidad de la muestra, incluida la digestión y recuperación de fragmentos de péptidos de geles SDS-PAGE o guanidinación de péptidos para mejorar la cobertura de la secuencia. Cada kit se ha optimizado para producir digestiones de péptidos de alta calidad para un análisis proteómico fiable mediante espectrometría de masas.

Kit de digestión tríptica y guanidinación en solución Pierce
El kit de digestión tríptica y guanidinación en solución proporciona un procedimiento optimizado y reactivos para aproximadamente 90 digestiones, cada una con 0,025 a 10 µg de proteína.

• Digestión completa: la tripsina digiere completamente la proteína en un rango de 0,025 a 10 µg (∼ 90 reactions)
• Específico: la reacción de guanidinación produce poca o ninguna modificación N-terminal
• Práctico: el kit incluye reactivos para digestión, reducción, alquilación y guanidinación
• Eficaz: protein can be digested and guanidinated in a single day

La tripsina en concreto fragmenta los enlaces peptídicos en el lado carboxilo de los residuos de arginina y lisina. Las señales de los péptidos que contienen arginina son generalmente más fuertes, debido a la cadena lateral más básica. Para mejorar la ionización general, la guanidinación convierte las lisinas en homoargininas y es específica para la amina de lisina, pero puede ocurrir mínimamente en la amina del N-terminal del péptido. Esta derivación conduce a un aumento en la intensidad de la lisina que contiene péptidos y mejora la cobertura de la secuencia en general.

Kit de digestión tríptica en gel Pierce
El kit de digestión tríptica en gel proporciona un juego completo de reactivos para realizar aproximadamente 150 digestiones en bandas de proteínas teñidas con colorantes fluorescentes o Coomassie coloidales. El kit incluye tripsina porcina modificada, tampones de decoloración, reactivos de reducción, reactivos de alquilación y tampones de digestión junto con instrucciones detalladas y sencillas.

• Completo: incluye todos los reactivos necesarios para la decoloración, reducción, alquilación y digestión tríptica de proteínas en gel
• Resistente: el procedimiento y los reactivos optimizados producen digestiones fiables y generación de datos utilizando una amplia gama de condiciones
• Específico: contiene tripsina de grado MS altamente purificada y modificada sin actividad quimotríptica y actividad autolítica mínima

Dos pasos clave de preparación de muestras son la digestión completa de proteínas en péptidos y la posterior concentración y limpieza de péptidos para el análisis de espectrometría de masas. El kit de digestión tríptica en gel Pierce realiza el primero de estos pasos para muestras de proteínas extraídas de cortes de gel. Las columnas y puntas de centrifugación Pierce C-18 permiten realizar el segundo paso para limpiar la muestra para que esté lista para MS.