Invitrogen™ Vybrant™ FLICA Caspase Apoptosis Assay Kits for flow cytometry

Los kits de ensayo de caspasa Vybrant FAM para citometría de flujo emplean un novedoso enfoque para la detección de caspasas activas: los kits aprovechan la metodología FLICA, que es una etiqueta de afinidad. Esta etiqueta de afinidad asocia una fracción de la fluorometilcetona (FMK), que puede reaccionar covalentemente con una cisteína, con una secuencia de aminoácidos específica de la caspasa. Se utilizan diferentes secuencias de reconocimiento de aminoácidos para detectar diferentes caspasas: ácido valina-alanina-aspártico (VAD) para las policaspasas (incluidas las caspasas-1, -3, -4, -5, -6, -7, -8 y -9), ácido aspártico-ácido glutámico-ácido valina-aspártico (DEVD) para caspasa-3/7 y leucina-ácido glutámico-treonina-ácido aspártico (LETD) para caspasa-8. Se incluye un grupo de carboxifluoresceína (FAM) como indicador.

Se considera que el reactivo FLICA interactúa con el centro de reacción enzimática de una caspasa activada a través de la secuencia de reconocimiento, y luego se acopla covalentemente a través de la fragmentación de la FMK. El inhibidor del FLICA es permeable en células y no citotóxico. Las moléculas FLICA no enlazadas se disipan fuera de la célula y se lavan; la señal fluorescente restante es una medida directa de la cantidad de caspasa activa que estaba presente en el momento en que se agregó el inhibidor. Los picos aproximados de excitación y emisión de los reactivos FLICA, yoduro de propidio y Hoechst 33342 son de 488 nm/⁄530 nm, 535 nm/⁄6617 nm y 350 nm/⁄461 nm, respectivamente. Los reactivos de detección incluidos en los kits de ensayo de policaspasas Vybrant FAM, ensayo de caspasas 3 y 7 y apoptosis de ensayo de caspasa 8 son 488⁄⁄530 FAM-VAD-FMK, 488/⁄530 FAM-DEVD-FMK y 488/⁄530 FAM-LETD-FMK, respectivamente.