Thermo Scientific™ EpiJET 5-hmC and 5-mC Analysis Kit

El kit de análisis de 5-hmC y 5-mC EpiJET incluye tres enzimas avanzadas: Bacteriófago T4 β-glucosiltransferasa (T4 BGT), Epi MspI y Epi HpaII. Los Epi MspI y Epi HpaII son isosquizómeros con diferente sensibilidad a la metilación C interna del sitio CCGG. Epi MspI digiere completamente el ADN genómico cuando la citosina, la 5-metilcitosina (5-mC) o la 5-hidroximetilcitosina (5-hmC) se encuentran dentro de su secuencia de reconocimiento, pero su actividad está completamente bloqueada cuando la 5-hmC está glucosilada. Epi HpaII solo corta el sitio CCGG no modificado.

El kit aprovecha la capacidad de T4 BGT para modificar específicamente los residuos de 5-hmC añadiendo la fracción de la glucosa a la 5-hmC y la sensibilidad de la enzima de restricción Epi MspI a la 5-hmC glucosilada. El T4 BGT está formulado para una glucosilación rápida, completa y altamente específica de 5-hmC en 15 minutos.

El análisis implica la glucosilación de muestras de ADN y la digestión de restricción posterior con Epi MspI y Epi HpaII. Los productos de digestión de restricción se analizan por qPCR con un par de cebadores que flanquean el sitio de interés de CCGG.

Características destacadas

• Eficiente y fiable: cuantificación precisa de 5-hmC y 5-mC
• Robusto: amplio rango (desde 0,2μg a 4μg) de ADN de entrada
• Rápido: procedimiento completado en 5 horas, sin incubación durante la noche

• Análisis y cuantificación de 5-hmC y 5-mC en secuencias CCGG

• T4 β - glucosiltransferasa, 5 u/μl.
• Tampón Epi 10X
• Glucosa –UDP 10X
• Epi MspI
• Epi HpaII
• ADN de control 5-hmC
• ADN de control 5-mC
• ADN de control no modificado
• Cebador de control 1
• Cebador de control 2
• Agua sin nucleasa
• Protocolo detallado