Thermo Scientific™ Ligasa de ADN T4 (5 U/μl)

Descripción

Catalice la formación de un enlace fosfodiéster entre el fosfato del extremo 5' y el hidroxilo del extremo 3' yuxtapuestos en ADN dúplex o ARN bicatenario con la ADN ligasa T4 Thermo Scientific™. La enzima repara muescas monocatenarias en ADN bicatenario, ARN o híbridos de ADN-ARN. También une fragmentos de ADN con extremos cohesivos o romos, pero actúa en ácidos nucleicos monocatenarios.

La ADN ligasa T4 requiere ATP como cofactor.

Características destacadas

• Activo en tampones de RT, PCR y enzimas de restricción Thermo Scientific (cuando se complementa con ATP)
• Rápido: la ligadura de extremos viscosos se realiza en 10 minutos a temperatura ambiente
• Se suministra con solución PEG eficaz para la ligadura de extremos romos

Aplicaciones

• Clonación de fragmentos de ADN generados por enzimas de restricción
• Clonación de productos de PCR
• Unión de adaptadores o enlaces oligonucleótidos bicatenarios a ADN
• Mutagénesis dirigida
• Polimorfismo en la longitud de fragmentos amplificados (AFLP)
• Detección de ARN mediado por ligasa (consulte la referencia 3)
• Reparación de muescas en ADN bicatenario, ARN o híbridos de ADN/ARN
• Circularización automática de ADN lineal

Notas

• La unión de T4 DNA Ligase al ADN puede provocar una alteración en el desplazamiento de bandas de geles de agarosa. Para evitarlo, incube las muestras con colorante de carga de ADN 6X y solución SDS a 70 °C durante 5 min o a 65 °C durante 10 minutos y enfríelas con hielo antes de la electroforesis.
• Durante el proceso de transformación, el volumen de la mezcla para la reacción de ligación no debe exceder el 10 % del volumen adecuado de las células competentes.
• Antes de la electrotransformación, elimine la T4 DNA Ligase de la mezcla de ligación mediante una columna de centrifugación o una extracción con cloroformo. El ADN extraído puede precipitarse posteriormente con etanol.