Invitrogen™ PrestoBlue™ and PrestoBlue™ HS Cell Viability Reagents

El reactivo de viabilidad celular PrestoBlue™ HS es una solución basada en resazurina y lista para su uso que funciona como indicador de salud celular mediante el uso de la potencia reductora de las células vivas para medir cuantitativamente la viabilidad. Al entrar en las células vivas, la resazurina se reduce a resorufina, un compuesto de color rojo y muy fluorescente. La alta fluorescencia de fondo que causan varios contaminantes reduce el rendimiento de los reactivos a base de resazurina. Para mejorar el rendimiento se desarrolló un proceso de purificación innovador que elimina estos contaminantes. Esta resazurina altamente purificada y no tóxica se utilizó en la formulación PrestoBlue estándar, con lo que se creó el reactivo de viabilidad celular PrestoBlue HS. Los cambios en la viabilidad se pueden detectar fácilmente utilizando un lector de placas basado en absorbencia o fluorescencia. El reactivo de viabilidad celular PrestoBlue HS se ha optimizado para la detección rápida y fiable de la viabilidad de células de mamíferos.

Las características del reactivo de viabilidad celular PrestoBlue HS incluyen:

• Eliminación de contaminantes de la resazurina: muestra una reducción de > 50 % en fluorescencia de fondo
• Relación señal-fondo aumentada en > 100 %: da como resultado una gran ventana de señal de ensayo
• Reactivo altamente sensible con una respuesta lineal: detecta un mínimo de 10 células por pocillo
• Formato práctico de adición y lectura: sin mezcla, ni lavado, ni lisis celular, y compatible con instrumentación basada en fluorescencia o absorbancia
• Se ha optimizado para la detección fiable de la viabilidad de células de mamíferos en solo 10 minutos

La medición de los cambios en la viabilidad celular es un método fundamental para evaluar la salud celular, determinar la genotoxicidad y evaluar fármacos anticancerígenos. La salud celular se puede supervisar mediante la detección de cambios en varios indicadores clave, incluidos los cambios en la integridad de la membrana plasmática, la síntesis de ADN, el contenido de ADN, la actividad enzimática, la presencia de ATP y el ambiente de reducción celular.

El control de los cambios en el entorno de reducción celular o la actividad metabólica mediante el uso de reactivos basados en resazurina es un indicador bien establecido y fiable de la viabilidad o la muerte celular. Al entrar en las células vivas, el ambiente de reducción celular reduce la resazurina a resorufina, un compuesto de color rojo y muy fluorescente. Las células viables convierten continuamente la resazurina en resorufina, lo que aumenta la fluorescencia general del medio que rodea a las células. Además, la conversión de la resazurina a resorufina produce un cambio de color pronunciado, por lo que la viabilidad celular también se puede detectar mediante lectores de placas basados en absorbancia.

Como consecuencia de los procesos de síntesis y fabricación, todos los reactivos basados en la resazurina contienen una cantidad detectable de contaminación por resorufina. La cantidad de contaminación puede variar considerablemente entre las fuentes del material y las condiciones de fabricación, lo que contribuye a las diferencias en la fluorescencia de fondo detectable. Se desarrolló un proceso innovador que elimina la resorufina contaminante, lo que produjo la resazurina de gran pureza que se utiliza en el reactivo de viabilidad celular PrestoBlue HS. Esta resazurina de alta pureza produce una disminución de > 50 % en la fluorescencia de fondo y un aumento de > 100 % en la relación señal-fondo. La viabilidad de células de mamíferos se puede detectar después de una incubación de 10 minutos con el reactivo de viabilidad celular PrestoBlue HS. Dado que no se requiere lisis, la solución PrestoBlue HS diluida se puede retirar y reemplazar con un medio de crecimiento completo para un cultivo de las células adicional.