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El sensor Premo™ FUCCI es un sensor de progresión del ciclo y la división celular en células vivas, es fluorescente de dos colores. Permite un análisis preciso y sensible del ciclo celular de células individuales o de una población celular mediante microscopía de fluorescencia, citometría de flujo o adquisición de imágenes de alto contenido. El sensor de ciclo celular Premo FUCCI se suministra con la tecnología BacMam 2.0 de alta eficiencia, permitiendo realizar estudios de ciclo celular en prácticamente cualquier tipo de célula. Proporcionado en un formato listo para su uso: simplemente añada, incube y obtenga imágenes. Premo FUCCI permite una expresión transitoria altamente eficiente en líneas celulares, células primarias y células madre.
Preciso: Expresión controlada por ciclo celular de indicadores brillantes GFP y RFP para el análisis de células vivas individuales o poblaciones
Altamente eficaz: > 90 % de la transducción de una amplia gama de líneas de células de mamíferos, incluidas las células primarias, las células madre y las neuronas.
Rápido y práctico: Simplemente añada el sensor de ciclo celular Premo FUCCI a sus células en un medio completo, incube durante la noche y analice
Seguro: Los reactivos BacMam no se integran ni se replican en células de mamíferos, no tienen ningún efecto citopático observable y son adecuados para manipulación de nivel de bioseguridad (BSL) 1
Visualización rápida y sencilla del ciclo celular Simplemente añada el sensor de ciclo celular Premo™ FUCCI listo para su uso a sus células en un medio completo, incube durante la noche y luego visualice la progresión del ciclo celular en poblaciones de células mediante microscopía de fluorescencia, citometría de flujo o instrumentos de adquisición de imágenes de alto contenido. Las células cambian en el G1 de rojo a amarillo en la interfase G1/S y a verde en las fases S, G2 y M, a medida que se expresan y degradan las fusiones de emGFP y TagRFP acopladas a dos proteínas reguladas por el ciclo celular. Cómo funciona Premo FUCCI se deriva del indicador de ciclo celular de ubiquitinación fluorescente (FUCCI), desarrollado por Miyawaki y colegas. FUCCI se basa en dos proteínas reguladas por el ciclo celular, la geminina y la Cdt1, fusionadas en una proteína fluorescente verde (emGFP) y roja (TagRFP), respectivamente. Puesto que la Cdt1 y la geminina están presentes solo durante fases específicas del ciclo celular, la pareja de las proteínas fluorescentes es igualmente dependiente del ciclo celular. La ubiquitinación por ubiquitina ligasa E3 específica se dirige a las construcciones de fusión en el proteasoma para su degradación. Las ligasas E3 muestran una regulación temporal de la actividad, dando como resultado un ciclo bifásico de los niveles de geminina y de Cdt1 durante el ciclo celular. La geminina GFP se degrada en la fase G1; la presencia de Cdt1-TagRFP se indica mediante fluorescencia roja dentro de los núcleos. Sin embargo, durante las fases S, G2 y M, la Cdt1 se degrada y solo queda geminina GFP, dando a las células núcleos fluorescentes verdes. Durante la transición G1/S, cuando los niveles de Cdt1 están disminuyendo y los de geminina están aumentando, ambas proteínas están presentes, dando una señal nuclear amarilla fluorescente. Este cambio de color dinámico (de rojo a amarillo y a verde) muestra claramente la progresión a través del ciclo y la división celular.
Desarrollado por la tecnología BacMam 2.0 La tecnología BacMam está basada en un virus de insecto (baculovirus) para una transducción eficiente y una expresión transitoria en células de mamíferos. El sensor de ciclo celular Premo™ FUCCI utiliza la tecnología BacMam 2.0 para permitir estudios del ciclo celular en casi cualquier tipo de célula, desde líneas celulares hasta células madre mediante la incorporación de un casete de expresión de mamífero para la construcción FUCCI. En comparación con la tecnología BacMam 1.0, la BacMam 2.0 no requiere el uso de un potenciador y se puede utilizar en un medio completo. No es necesario purificar el plásmido ni preocuparse por la integridad y la calidad de los vectores. No se requieren lípidos, productos químicos de carga de colorantes ni otros tratamientos potencialmente dañinos. BacMam 2.0 incorpora elementos que mejoran en gran medida la eficiencia de la transducción y los niveles de expresión: una proteína de cápside pseudotiapada para una entrada celular más eficiente, un promotor de CMV mejorado, y el elemento regulador postranscripcional de la hepatitis Woodchuck (WPRE).
Expresión valorable que dura hasta dos semanas La expresión transgénica transitoria dura desde aproximadamente cinco días en líneas celulares transformadas, hasta dos semanas en células de división lenta, como algunos tipos de células primarias; hemos representado neuronas diferenciadas terminalmente más de tres semanas después de la transducción. Además, la tecnología BacMam permite una optimización definida porque le da la capacidad de valorar con precisión los niveles de expresión. Los baculovirus no se replican en las células de los mamíferos, ni se expresan genes virales, lo que les da un excelente perfil de seguridad y una falta de efectos citopáticos en las células de los mamíferos.
Análisis celular, ciclo celular, proliferación celular, viabilidad celular, proliferación y función, adquisición de imágenes celulares, inmunocitoquímica (ICC), inmunofluorescencia (IF)
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