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Thermo Scientific™ Mass Spectrometry Compatible Crosslinkers
Descripción
El entrecruzamiento químico en combinación con la espectrometría de masas es un método poderoso para mejorar la caracterización de proteínas e identificar las interacciones proteína-proteína. Este método se ha aplicado a complejos de proteínas recombinantes y nativas, y más recientemente, a lisados de células enteras o a organismos unicelulares intactos con el fin de identificar interacciones entre proteínas a escala global. La función de enriquecimiento de DSPP y TBDSPP mejora la detección de proteínas entrecruzadas al reducir la complejidad de la muestra a través de la separación de los péptidos entrecruzados de los no entrecruzados.
• Reactivos cristalinos de alta pureza para la estructura de proteínas y la caracterización de interacciones
• Versión permeable a la membrana (TBDSPP) para reticulación intracelular
• Enriquecible usando Fe-NTA IMAC o TiO2 MOAC
DSPP (ácido fosfónico de fenilo disuccinimidilo, PhoX) y TBDSPP (fosfonato de fenil tert-butilo disuccinimidilo, tBu-PhoX) son reticuladores fosfoenriquecidos que contienen un éster de N-hidroxisuccinimida (NHS) reactivo con amina en cada extremo de un brazo espaciador de 7 átomos con un grupo de ácido fosfónico (DSPP) o éster de fosfonato (TBDSPP) para el enriquecimiento. Ambos reaccionan eficazmente con grupos de amina primarios (-NH2) en pH 7–9 en tampones alcalinos para formar enlaces amida estables. Los grupos éster de ácido fosfónico o fosfonato se pueden usar luego para enriquecer péptidos entrecruzados usando cromatografía de afinidad de metal inmovilizado (IMAC) o cromatografía de afinidad de óxido de metal (MOAC).
De los dos entrecruzadores de MS enriquecidos, el DSPP es más soluble en agua que el TBDSPP y es mejor para el entrecruzamiento in vitro, las proteínas purificadas simples y los complejos de proteínas. TBDSPP es mejor para la reticulación intracelular debido al aumento de la permeabilidad de la membrana. Aunque ambos entrecruzadores se pueden enriquecer usando métodos de fosfopéptidos tradicionales, los péptidos entrecruzados con TBDSPP deben incubarse primero con TFA para eliminar los grupos de protección terc-butilo. El grupo de ácido fosfónico de TBDSPP (después de la escisión con ácido) no es un sustrato para las fosfatasas, lo que brinda la oportunidad de eliminar los fosfopéptidos endógenos en las muestras antes del enriquecimiento.
Nota: Para el análisis de alta resolución de péptidos entrecruzados, la columna de LC recomendada para la fuente Nanospray Flex es la columna de LC Acclaim PepMap 100 C18 (n.º de cat. de referencia 164940 o 164568). Para la fuente EASY-Spray, la columna LC recomendada es la columna LC EASY-Spray C18 (n.º ES900 o ES904).
Especificaciones
Especificaciones
| Reactividad química | Amina-amina |
| Cleavable | No |
| Descripción | DSPP |
| Peso molecular | 440.25 |
| Pegilado | No |
| Pureza | 90% |
| Longitud del brazo del separador | 4,3 Å |
| Contenido y almacenamiento | Tras su recepción, almacenar a -20 °C, protegido de la humedad. |
| Permeabilidad celular | No |
| Línea de productos | Reactivos de MS |
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