Invitrogen™ Premo™ Cellular Hydrogen Peroxide Sensor

El sensor de peróxido de hidrógeno celular roGFP-Orp1 Chimera
Premo™ combina la selectividad de una quimera roGFP-Orp1 con la eficiencia de transducción de la tecnología BacMam 2.0. La proteína fluorescente verde sensible al redox (roGFP) detecta el potencial redox a través de dos cisteínas introducidas en la estructura de barril β de la proteína GFP. La formación de disulfuro entre las cisteínas conduce a la protonación de GFP y aumenta los espectros de excitación de 400 nm a expensas de los espectros de excitación de 488 nm. La fluorescencia en las dos longitudes de onda de excitación diferentes se puede cuantificar utilizando la misma longitud de onda de emisión de 515 nm. Orp1 es una proteína de levadura sensible al peróxido de hidrógeno que forma disulfuros tras la reacción con el peróxido de hidrógeno y tiene la capacidad de transducir señales a otras proteínas redox mediante el intercambio de disulfuro. Al combinar las propiedades selectivas del peróxido de hidrógeno de Orp1 y roGFP, es posible cuantificar de manera selectiva el peróxido de hidrógeno en las células.

Tecnología BacMam
Con la tecnología BacMam incorporada, este sensor está listo: solo hay que añadirla a las células en medios de crecimiento e incubar durante la noche. La tecnología BacMam se basa en el uso de un virus de células de insecto (baculovirus) para administrar y expresar de manera eficiente genes en células de mamíferos. Debido a que las células de mamíferos no soportan la replicación de los baculovirus, la transducción se tolera extremadamente bien y, por lo general, carece de efectos citopáticos, incluso con niveles altos de virus.