Invitrogen™ LanthaScreen™ TR-FRET PPAR alpha Coactivator Assay Kit, goat

Este kit contiene anticuerpo Tb-anti-GST de cabra; los otros componentes del kit son los mismos que los del kit A15133:

El ensayo del coactivador de PPAR (receptor activado por proliferador de peroxisomas) alfa LanthaScreen™ TR-FRET proporciona un método sensible y sólido para la detección de alto rendimiento de los potenciales ligandos de PPAR alfa como agonistas o antagonistas del reclutamiento de coactivadores dependientes de ligandos. El kit utiliza un anticuerpo anti-GST marcado con terbio (Tb), un péptido coactivador marcado con fluoresceína y un dominio recombinante humano de unión a ligando de PPAR alfa (PPAR alfa-LBD) que se etiqueta con glutatión-S-transferasa (GST) en un formato de ensayo homogéneo de mezcla y lectura.

Modo agonista:
Al ejecutar el ensayo del coactivador de PPAR alfa LanthaScreen™ TR-FRET en modo agonista (para identificar compuestos agonistas), se añade PPAR alfa-LBD a los compuestos de ensayo de ligando, seguido de la adición de una mezcla de péptido coactivador de fluoresceína y anticuerpo anti-GST marcado con Tb. Después de un periodo de incubación a temperatura ambiente, se calcula la relación TR-FRET de 520 nm/495 nm y se puede utilizar para determinar la EC50 a partir de una curva dosis-respuesta del compuesto. Basado en la biología de la interacción del péptido PPAR alfa-coactivador, este ligando EC50 es un valor compuesto que representa la cantidad de ligando necesaria para unirse al receptor, efectuar un cambio conformacional y reclutar el péptido coactivador (ver figura 1).

Modo antagonista:
Cuando el ensayo del coactivador de PPAR alfa LanthaScreen™ TR-FRET se ejecuta en modo antagonista (para identificar compuestos antagonistas), se agrega PPAR alfa-LBD a los compuestos de prueba de ligando, seguido de la adición de una mezcla de agonista, péptido coactivador de fluoresceína y anticuerpo anti-GST marcado con Tb (figura 2). La concentración de agonista utilizada en este modo es la concentración de EC80 determinada por la primera ejecución del ensayo en modo agonista.

Contenido y almacenamiento:
El kit de ensayo del coactivador de PPAR alfa LanthaScreen™ TR-FRET contiene proteína PPAR alfa-LBD (GST), péptido coactivador PGC1a marcado con fluorescencia, anticuerpo anti-GST marcado con Tb y tampones. Almacene los componentes como se indica en el protocolo del ensayo (-80 °C, -20 °C o 4 °C).