Invitrogen™ Glutathione S-Transferase Fluorescent Activity Kit

El kit de la actividad de la glutatión S-transferasa (para uso exclusivo en investigación) es un ensayo que permite determinar la actividad fluorescente y está diseñado para la detección y cuantificación de la actividad de la glutatión S-transferasa en muestras de suero, plasma, orina y lisados celulares.

Este kit completo listo para usar incluye placas negras de 96 pocillos, estándar de glutatión S-transferasa (10 U/ml), sustrato de glutatión S-transferasa y otros componentes para realizar el ensayo. Para utilizar este kit se necesita un lector de microplacas de 96 pocillos capaz de leer emisiones fluorescentes a 460 nm, con excitación de 370 a 410 nm.

Características de rendimiento
• Tipo de ensayo: kit de actividad fluorescente
• Tipos de muestra: suero, plasma, orina y lisados celulares
• Sensibilidad: 2,70 mU/ml
• Intervalo de curva estándar: 7,8–500 mU/ml
• Reactividad: independiente de la especie

Antecedentes
La familia glutatión S-transferasa (GST) de isoenzimas funciona para desintoxicar y neutralizar una amplia variedad de moléculas electrofílicas ya que interviene en su conjugación con glutation reducido1. La GST humana está codificada por 5 familias de genes, expresadas en casi todos los tejidos como cuatro formas citosólicas y una microsomal. Si se divide la familia por puntos isoeléctricos, se observa que las clases de alfa básico (pI de 8 a 11), mu neutro (pI de 5 a 7) y pi acídico (pH < 5) están pobladas por subclases adicionales, y cada isozima presenta una especificidad diferencial para determinadas moléculas electrofílicas. Este ensayo está validado para usarse en muestras de orina humana, suero, EDTA, plasma con heparina, hígado de pez sapo (Opsanus tau) y hemolinfa de ostra. La mayoría de los lisados celulares también son compatibles. La actividad de la GST varía entre los tejidos y las especies, por lo que este kit puede medir la actividad de la GST en fuentes de especies distintas a la humana.

Principio del ensayo
El kit de actividad de la glutatión S-transferasa está diseñado para medir cuantitativamente la actividad de la GST presente en una variedad de muestras. Se proporciona un estándar de GST para generar una curva estándar para el ensayo y todas las muestras deben leerse en la curva estándar. El kit utiliza una molécula no fluorescente que es un sustrato para la enzima GST que se une covalentemente al glutatión (GSH) para producir un producto altamente fluorescente. Al mezclar la muestra o el estándar con el reactivo de detección suministrado y GHS y al incubar a temperatura ambiente durante 30 minutos, se produce un producto fluorescente que se lee a 460 nm en un lector de placas fluorescentes con excitación a 390 nm.