Thermo Scientific™ Desoxinucleotidil transferasa terminal (20 U/μl)

• Incorpora nucleótidos modificados (por ejemplo, nucleótidos marcados con fluoresceína, biotina y aminoalilo) Fuente: Células E. coli con un gen clonado que codifica la desoxinucleotidil transferasa terminal de timo bovino

• Ausencia de otras endo o exodesoxirribonucleasas, fosfatasas y ribonucleasas confirmada mediante pruebas de calidad apropiadas

Fuente:

• Células E. coli con un gen clonado que codifica la desoxinucleotidil transferasa terminal de timo bovino

• Una unidad de la enzima cataliza la incorporación de 1 nmol de desoxitimilidato a una fracción polinucleotídica (adsorbida en DE-81) en 60 minutos a 37 °C.
• La actividad enzimática se analiza en la siguiente mezcla:
• 200 mM de cacodilato de potasio (pH 7,2), 1 mM de CoCl₂, 0,01 % (v/v) de Triton X-100, 10 μm de oligo(DT)₁₀, 1 mM de dTTP y 0,4 MBq/ml [³H]-dTTP
Tampón de almacenamiento:
• La enzima se suministra en: 100 mM de acetato de potasio (pH 6,8), 2 mM de 2-mercaptoetanol, 0,01 % (v/v) de Triton X-100 y 50 % (v/v) de glicerol

Tampón de reacción 5X:

• 1 m de cacodilato de potasio, 125 mM de Tris, 0,05 % (v/v) de Triton X-100, 5 mM de CoCl₂ (pH 7,2 a 25 °C)

Inhibición e inactivación:

• Inhibidores: quelantes de metales, amonio, cloruro, yoduro, iones fosfato
• Inactivación por calor a 70 °C durante 10 min o añadiendo EDTA

Recomendada para:

Producción de homopolímeros y heteropolímeros sintéticos (1); adición de colas homopoliméricas a ADN bicatenarios lineales con cualquier tipo de extremo 3'-OH (2, 3); marcado de ADN y oligodesoxiribonucleótidos (2, 4-8); 5'-RACE (Amplificación rápida de los extremos de ADN complementario) (9); localización in situ de apoptosis (10)

Nota:

Debido a la presencia de CoCl₂, el TdT Reaction Buffer no es compatible con las aplicaciones posteriores. Es necesario eliminar el CoCl₂ de la mezcla de reacción mediante una columna de centrifugación o una extracción con fenol/cloroformo y posterior precipitación con etanol.