Thermo Scientific™ PstI (10 U/μl)

5'..C T G C A▵G...3'

3'..G▵A C G T C...5'

Condiciones para una actividad del 100 %

• 1 tampón O: 50 mm de Tris-HCl (pH 7,5 a 37 °C), 10 mm de MgCl₂, 100 mm de NaCl y 0,1 mg/ml de BSA
• Incubar a 37 °C.

Tampón de almacenamiento

• PstI se suministra en: 10 mm de Tris-HCl (pH 7,4 a 25 °C), 200 mm de NaCl, 1 mm de DTT, 0,1 mm de EDTA, 0,15 % de Triton X-100, 0,2 mg/ml de BSA y 50 % (v/v) de glicerol

Ligadura y refragmentación

• Tras una sobredigestión de 50 veces la cantidad recomendada de PstI, más del 95 % de los fragmentos de ADN pueden ligarse y recortarse

Efectos de metilación

• Dam: nunca se solapa, sin efecto.
• Dcm: nunca se solapa, sin efecto.
• CpG: nunca se solapa, sin efecto.
• EcoKI: nunca se solapa, sin efecto.
• EcoBI: nunca se solapa, sin efecto.

Digestión de ADN integrado en agarosa

• Se requieren como mínimo 5 unidades de la enzima para la digestión completa de 1 μg de ADN lambda integrado en agarosa en 16 horas

Extremos compatibles

• Alw21I, ApaI, BseSI, Eco24I, Mph1103I, PstI, SacI, SdaI

Nota:

Un pH alto, el bajo contenido en sal, el alto nivel de glicerol, y un 8 % de DMSO puede causar actividad estrella (Malyguine, E., et al., Gene, 8, 163-177, 1980). Secuencias circundantes: La presencia de secuencias adyacentes de pares de bases G-C confiere una resistencia significativa a la escisión (Armstrong, K. and Bauer, W.R., NAR, 10, 993-1007, 1982). El 100 % de la incorporación de dUTP en el sitio de reconocimiento reduce la escisión de PstI al 25 % (Glenn, T.C., et al., Biotechniques, 17, 1086-1090, 1994). PstI no cortará AGCTGCAG cuando se metile por AluI metiltransferasa.