Thermo Scientific™ PagI (BspHI) (10 U/μL)

5'...T▵C A T G A...3'

3'...A G T A C▵T...5'

Condiciones para una actividad del 100 %:

• 1 tampón O: 50 mm de Tris-HCl (pH 7,5 a 37 °C), 10 mm de MgCl₂, 100 mm de NaCl y 0,1 mg/ml de BSA
• Incubar a 37 °C.

Tampón de almacenamiento:

• Pagl se suministra en: 10 mm de Tris-HCl (pH de 7,4 a 25 °C), 100 mm de nacl, 1 mm de DTT, 1 mm de EDTA, 0,2 mg/ml de BSA y 50 % (v/v) de glicerol

Ligadura y refragmentación:

• Tras una sobredigestión con 50 veces la cantidad recomendada de PagI, más del 95 % de los fragmentos de ADN pueden ligarse y recortarse

Efectos de metilación:

• Dam: puede solaparse, reducción de fragmentación.
• Dcm: nunca se solapa, sin efecto.
• CpG: nunca se solapa, sin efecto.
• EcoKI: nunca se solapa, sin efecto.
• EcoBI: puede solaparse, reducción de fragmentación

Digestión del ADN integrado en agarosa:

• Se requieren como mínimo 5 unidades de la enzima para la digestión completa de 1 μg de ADN lambda integrado en agarosa en 16 horas

Extremos compatibles:

• AflIII, PscI, DsaI, Eco130I, NcoI

Nota:

La concentración baja de sales, la concentración alta de glicerol (> 5 %), un pH >8 o un gran exceso de la enzima pueden producir actividad estrella (star activity). La fragmentación con PagI se reduce debido a la metilación de dam solapante. Para evitar metilación dam, utilice una cepa con dam-, dcm-, como GM2163 (M0099).