Thermo Scientific™ MboII (5 U/μL)

5'...G A A G A (N)₈▵...3'

3'...C T T C T (N)₇▵...5'

Condiciones para una actividad del 100 %:

• 1 tampón B: 10 mm de Tris-HCl (pH 7,5 a 37 °C), 10 mm de MgCl₂ y 0,1 mg/ml de BSA
• Incubar a 37 °C.

Tampón de almacenamiento:

• MboII se suministra en: 10 mm de Tris-HCl (pH de 7,5 a 25 °C), 50 mm de KCl, 1 mm de DTT, 0,1 mm de EDTA, 0,2 mg/ml de BSA y 50 % (v/v) de glicerol

Efectos de metilación:

• Dam: puede solaparse, bloqueada.
• Dcm: nunca se solapa, sin efecto.
• CpG: puede solaparse, sin efecto.
• EcoKI: nunca se solapa, sin efecto.
• EcoBI: puede solaparse, sin efecto.

Nota:

Analizado mediante ADN de lambda (dam) (SD0021). MboII se bloquea por metilación dam solapada. Para evitar metilación dam, utilice una cepa dam, dcm-, como GM2163 (M0099). Una sobredigestión con más de 15 veces la cantidad recomendada de MboII puede provocar una actividad estrella. MboII produce fragmentos de ADN que tienen una extensión de base simple 3 que son más difíciles de ligar que los fragmentos de extremo romo. Mboll puede permanecer asociada al ADN fragmentado. lo que puede provocar un desplazamiento de las bandas de ADN durante la electroforesis. Para evitar patrones atípicos de las bandas de ADN, use colorante de carga de ADN 6X y solución SDS para la preparación de muestras o caliente el ADN digerido en presencia de SDS antes de la electroforesis.