Thermo Scientific™ BstXI (10 U/μL)

5'...C C A N N N N N▵N T G G...3'

3'...G G T N▵N N N N N A C C...5'

Condiciones para una actividad del 100 %:

• 1 tampón O: 50 mm de Tris-HCl (pH 7,5 a 37 °C), 10 mm de MgCl₂, 100 mm de NaCl y 0,1 mg/ml de BSA
• Incubar a 55 °C.

Tampón de almacenamiento:

• BstXI se suministra en: 10 mm de Tris-HCl (pH de 7,5 a 25 °C), 50 mm de KCl, 1 mm de DTT, 0,1 mm de EDTA, 0,2 mg/ml de BSA y 50 % (v/v) de glicerol

Ligadura y refragmentación:

• Tras una sobredigestión con 50 veces la cantidad recomendada de BstXI, más del 95 % de los fragmentos de ADN pueden ligarse y recortarse

Efectos de metilación:

• Dam: nunca se solapa, sin efecto.
• Dcm: puede solaparse, reducción de fragmentación.
• CpG: nunca se solapa, sin efecto.
• EcoKI: nunca se solapa, sin efecto.
• EcoBI: nunca se solapa, sin efecto.

Digestión del ADN integrado en agarosa:

• Se requieren como mínimo 5 unidades de la enzima para la digestión completa de 1 μg de ADN lambda integrado en agarosa en 16 horas

   

Nota:

Con la incubación a 37 °C se obtiene una actividad del 50%. Una sobredigestión con más de 15 veces la cantidad recomendada de BstXI puede provocar una actividad estrella (star activity). La fragmentación con BstXI se reduce debido a la metilación de dcm solapante. Para evitar metilación dcm, utilice una cepa con dam-, dcm-, como GM2163 (M0099).