Invitrogen™ EnzChek™ Caspase-3 Activity Assay Kits

Descripción

Logre la detección sencilla y fiable de la apoptosis mediada por la actividad de la caspasa-3 con el kit de ensayo de actividad de la caspasa-3 EnzChek, que aprovecha los sustratos especialmente diseñados que se vuelven fluorescentes al momento de la escisión mediante la enzima caspasa-3. El kit de ensayo de actividad de la caspasa-3 EnzChek está disponible con el sustrato Z-DEVD-AMC o Z-DEVD-R110, que da un producto fluorescente brillante al momento de la escisión proteolítica por caspasa 3/7.

El kit de ensayo de actividad de caspasa-3 EnzChek permite la detección de apoptosis al proporcionar un método sencillo y fiable para analizar la actividad de la caspasa-3/7. El kit se puede utilizar para medir continuamente la actividad de la caspasa-3/7 en extractos celulares y preparaciones enzimáticas purificadas mediante un fluorímetro o un lector de microplacas de fluorescencia.

Las características clave del kit de ensayo de actividad de caspasa-3 EnzChek incluyen:
• Ensayo fluorescente con ajustes estándar de excitación/emisión de fluoresceína (FITC)
• Su formato permite la medición continua de la actividad de la caspasa-3/7 en extractos celulares
• Controles fluorescentes y enzimáticos incluidos

El sustrato derivado de la aminometilcumarina (AMC) (Z-ácido aspártico-ácido glutámico-ácido valina-aspártico (DEVD)-AMC) que se incluye en el kit de ensayo de actividad de la caspasa-3 EnzChek es poco fluorescente en el intervalo de UV (excitación/emisión máxima de ˜ 330/390 nm), pero produce un producto azul fluorescente brillante (excitación/emisión máxima de ˜ 342/441 nm) tras la escisión proteolítica. El kit se puede utilizar para medir continuamente la actividad de la caspasa-3 y las proteasas estrechamente relacionadas en extractos celulares y preparaciones enzimáticas purificadas mediante un fluorímetro o un lector de microplacas de fluorescencia.

El sustrato derivado de rodamina 110 (Z-DEVD-R110) utilizado en el kit de ensayo de actividad de la caspasa-3 EnzChek es un compuesto de bisamida no fluorescente que, tras la escisión enzimática, se convierte en un proceso de dos pasos en la monoamida fluorescente y, luego, en el producto R110 aún más fluorescente. Ambos productos de hidrólisis presentan propiedades espectrales similares a las de la fluoresceína, con longitudes de onda de excitación y emisión máximas de 496 nm y 520 nm, respectivamente.

Además de los sustratos, el kit de ensayo de actividad de la caspasa EnzChek contiene el inhibidor de aldehído reversible Ac-DEVD-CHO, así como una AMC o R110 estándar de referencia. El inhibidor Ac-DEVD-CHO confirma que las señales de fluorescencia tanto en las poblaciones celulares inducidas como en las de control se deben a la actividad de la proteasa caspasa-3/7. El estándar de referencia permite cuantificar la cantidad de AMC o R110 liberada en la reacción.