Invitrogen™ CellSensor™ LEF/TCF-bla SW480 Cell Line

Descripción

La línea de células LEF/TCF-bla SW480 CellSensor™ contiene un gen reportero de la betalactamasa bajo control de la secuencia de unión del factor potenciador linfocítico/factor de célula T (LEF/TCF) integrado de forma estable en las células SW480, que expresan una forma truncada de la proteína supresora tumoral adenomatous poluposis coli (APC). Esta línea de células es una población clonal aislada por la citometría de flujo, con la vía validada utilizando RNAi contra la beta-catenina. La versión truncada y con pérdida de función de APC expresada en esta línea de células impide el ensamblaje adecuado del complejo de destrucción de beta-catenina. Esto da lugar a la acumulación de beta-catenina no complejada y a la activación constitutiva de esta vía de señalización, que no es susceptible a una estimulación posterior con el ligando Wnt. Se ha probado esta línea de células bajo concentraciones variables de DMSO y números celulares para determinar el rendimiento del ensayo en condiciones variables. Debido a la actividad constitutiva de esta vía y a la ausencia de inhibidores conocidos, todos los estudios de optimización para esta línea CellSensor™ se realizaron mediante el ácido clavulónico inhibidor de la betalactamasa. El tratamiento con ácido clavulónico imita la inhibición completa de la vía de señalización y permite determinar la ventana máxima del ensayo. La señalización Wnt a través de la beta-catenina desempeña un papel central en el desarrollo y la homeostasis. Esta vía se ve invariablemente alterada en los tumores colorrectales y suele estar afectada por la mutación en otros cánceres. La unión del ligando Wnt y la activación de los receptores transmembrana frizzled transducen la señal a una proteína citoplasmática conocida como dishevelled, que entonces inhibe la serina/treonina cinasa glucógeno sintasa cinasa 3 beta (GSK3B). Esta señal conduce a la inactivación funcional y la disociación de un complejo multiproteico de destrucción de beta-catenina formado por APC, GSK3B y un andamio de axina. Esto da lugar a la desfosforilación y disociación de la beta-catenina. La beta-catenina no fosforilada se estabiliza y se acumula en el citoplasma de la célula. A continuación, la beta-catenina se asocia con la familia de factores de transcripción LEF/TCF en el núcleo, lo que da lugar a la transcripción y expresión de genes diana como c-myc, c-jun, fra y ciclina D1. Si es cliente del sector académico y sin ánimo de lucro, consulte nuestros precios especiales.