Invitrogen™ Bac-to-Bac™ N-His TOPO™ Cloning Kit

Descripción

La expresión de baculovirus Bac-to-Bac™ es un método eficaz para producir baculovirus para la expresión de proteínas de alto nivel en células de insectos. Se basa en la generación de virus recombinante por la transposición específica de sitio en E. coli en lugar de una recombinación homóloga en células de insectos. Nuevo: vectores pFastBacTOPO™

Expresión de proteínas fiable y rápida
El sistema de expresión de baculovirus Bac-to-Bac™ es más rápido y fácil que la expresión de baculovirus tradicional, y mantiene altos niveles de expresión de proteínas. Se basa en la transposición específica de sitio en E. coli en lugar de una recombinación homóloga en células de insectos. El sistema de expresión de baculovirus Bac-to-Bac™ ha recibido muchos elogios en la literatura académica. Al menos 80 citas anuales desde el año 2000

Los sistemas tradicionales de baculovirus requieren la purificación y amplificación de un sobrenadante viral inicial de bajo título. Esto necesita un análisis de placa, que requiere mucho tiempo. Sin embargo, el vector Bac-to-Bac™ pFastBac™ se recombina con el bacmid en células competentes de E.coli DH10Bac™ para formar un bacilo de expresión. Transfecta el bacmid en células de insectos para la producción rápida de un alto título de partículas de baculovirus recombinantes puros en la primera transfección. Ahorrará preciadas semanas. Obtenga un stock de baculovirus P2 puro el día 10 sin necesidad de un tedioso ensayo de placas (consulte la figura 1)

Alta expresión, detección fácil
pFastBac™ utiliza el potente promotor de poliedrina para generar altos niveles de expresión en una variedad de líneas celulares de insectos como Sf9, Sf21 y células High Five.™

Nuevas adiciones:
Los vectores Bac-to-Bac™ pFastBac también están disponibles como vectores pFastBacTOPO™. Los vectores pFastBacTOPO™ son vectores Blunt™ TOPO™ y se suministran con E. coli Mach1™-T1R para facilitar la clonación y la propagación pFastBac⁄GOI. Los nuevos vectores le permiten:

Amplificar su gen de interés (GOI) con una enzima de PCR de alta fidelidad como Accuprime™ Pfx SuperMix.

Clonar con TOPO™ el producto de PCR de extremo romo en el nuevo vector en solo cinco minutos.

Visualizar colonias ocho horas después de colocarlas en placas selectivas de ampicilina porque las células de E.coli Machu1™-T1R tienen un tiempo de duplicación más rápido comparado con otras cepas de clonación estándar.

Con el kit de clonación o expresión Bac-to-Bac™ N-His TOPO™, puede producir una proteína de fusión de His con terminación de tipo N con un sitio de escisión TEV para purificar con resina quelante de níquel (sistema de purificación Invitrogen ProBond™) y generar una proteína nativa con la ayuda de la popular proteasa AcTEV de Invitrogen™.

Los nuevos vectores combinan la tecnología de clonación TOPO™ con las características de expresión de baculovirus Bac-to-Bac™ altamente reconocidas para permitir la clonación fácil y la expresión de proteínas de alto nivel.
Los vectores pFastBacTOPO™ se ofrecen como kits de clonación y expresión.