Marcadores de peso molecular de proteínas

Un marcador de peso molecular de proteínas, también conocido como escalera de proteínas o estándar de proteínas, es una mezcla de proteínas con pesos moleculares conocidos que se utilizan como puntos de referencia en la electroforesis en gel. Estos marcadores son esenciales para estimar los pesos moleculares de las proteínas en una muestra comparando sus distancias de migración durante la electroforesis. Las características clave de los marcadores de peso molecular de proteínas son:

• Pesos moleculares conocidos: El marcador contiene proteínas con pesos moleculares precisamente determinados, que a menudo varían desde unos pocos kilodaltons (kDa) hasta varios cientos de kDa.
• Preteñidos o no teñidos: Los marcadores preteñidos están preetiquetados con colorantes, lo que permite una fácil visualización durante y después de la electroforesis. Son útiles para monitorear el progreso de la corrida y para la estimación inmediata del tamaño de las proteínas. Los marcadores no teñidos no están teñidos y generalmente requieren teñido después de la electroforesis (por ejemplo, con Coomassie Brilliant Blue o tinción de plata) para ser visualizados.
• Rango amplio o rango específico: Los marcadores de rango amplio cubren una amplia gama de pesos moleculares, lo que los hace versátiles para diversas aplicaciones. Los marcadores de rango específico están diseñados para cubrir un rango más estrecho de pesos moleculares, proporcionando una mayor resolución en rangos de tamaño específicos.

Aplicaciones

• SDS-PAGE (Electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecilsulfato de sodio): Los marcadores de peso molecular de proteínas se utilizan comúnmente en SDS-PAGE para estimar los pesos moleculares de proteínas desnaturalizadas. El SDS da a las proteínas una carga negativa uniforme, permitiendo que se separen según su tamaño.
• Western Blotting: Después de transferir proteínas de un gel SDS-PAGE a una membrana, los marcadores de peso molecular ayudan a identificar las posiciones de las proteínas objetivo durante la inmunodetección.
• PAGE nativa: En PAGE nativa, donde las proteínas no están desnaturalizadas, los marcadores de peso molecular ayudan a estimar los tamaños de las proteínas en sus estados nativos y funcionales.

Cómo usar los marcadores de peso molecular de proteínas

• Mezcle el marcador de proteínas con un tampón de carga apropiado, si es necesario. Cargue el marcador en uno o más pocillos del gel junto con sus muestras de proteínas.
• Electroforesis: Ejecute el gel bajo las condiciones apropiadas (por ejemplo, voltaje, tiempo). Después de la electroforesis, visualice las proteínas utilizando métodos de tinción o detección apropiados. Compare las distancias de migración de las proteínas en sus muestras con las bandas del marcador para estimar sus pesos moleculares.

Al seleccionar marcadores de peso molecular de proteínas, es importante considerar varios factores para asegurarse de que cumplan con las necesidades específicas de su experimento y proporcionen resultados fiables. Aquí hay cinco consideraciones clave:

1. Rango de peso molecular

   • Asegúrese de que el marcador cubra el rango de peso molecular relevante para sus proteínas de interés. Si sus proteínas son pequeñas, se necesita un marcador con un rango inferior, mientras que para proteínas más grandes, se requiere un marcador con un rango superior.
   • Considere la resolución dentro del rango de peso molecular. Algunos marcadores proporcionan bandas estrechamente espaciadas para una mejor resolución de proteínas en un rango específico.

2. Tipo de visualización

   • Los marcadores preteñidos están preetiquetados con colorantes, lo que permite una visualización inmediata durante y después de la electroforesis. Son útiles para rastrear el progreso de la corrida y para una estimación rápida del tamaño.
   • Los marcadores no teñidos requieren tinción post-electroforesis (por ejemplo, Coomassie Brilliant Blue o tinción de plata) para ser visualizados. A menudo se utilizan cuando se necesita una cuantificación precisa o protocolos de tinción específicos.
   • Los marcadores de doble color o multicolor contienen proteínas etiquetadas con diferentes colores, proporcionando puntos de referencia más detallados y ayudando en la precisión de la estimación del peso molecular.

3. Compatibilidad con métodos de detección

   • Asegúrese de que el marcador sea compatible con la tinción Coomassie Brilliant Blue si esta es su método elegido.
   • Verifique la compatibilidad con la tinción de plata si esta es su método elegido, que es más sensible pero puede no funcionar bien con todos los marcadores.
   • Si planea usar el marcador para Western blotting, asegúrese de que sea compatible con el método de detección (por ejemplo, quimioluminiscencia, fluorescencia) y que las proteínas del marcador puedan ser detectadas junto con sus proteínas objetivo.

4. Precisión y reproducibilidad

   • Elija marcadores conocidos por su consistencia de lote a lote para asegurar resultados reproducibles en diferentes experimentos.
   • Seleccione marcadores que produzcan bandas nítidas y bien definidas para una estimación precisa del peso molecular.

5. Facilidad de uso y costo

   • Considere cuán fácil es preparar y cargar el marcador. Los marcadores premezclados con tampón de carga pueden ahorrar tiempo y reducir errores de preparación.
   • Equilibre el costo del marcador con su presupuesto, asegurándose de que cumpla con los criterios necesarios de calidad y rendimiento. Los marcadores de mayor calidad pueden ser más caros, pero pueden proporcionar resultados más fiables y precisos.