Thermo Scientific™ MuA Transposase

El kit Mutation Generation System™ (MGS™ Kit) está diseñado para la construcción rápida de bibliotecas de mutaciones de inserción para cualquier tipo de clones de ADN. El sistema emplea la maquinaria de transposición altamente eficiente del bacteriófago Mu para generar un conjunto de 15 bp mutantes de inserción que pueden ser utilizados en una variedad de análisis funcionales de las proteínas codificadas o regiones de AND reguladoras.

Los productos de transposón Thermo Scientific se basan en la maquinaria de transposición del bacteriófago Mu. Durante la fase lítica del ciclo vital del fago, la maquinaria replica su genoma transponiendo repetidamente dentro del genoma del huésped. La reacción de transposición de Mu ha sido modificada en una reacción in vitro catalizada por una sola enzima, la transposasa MuA. En este sistema, una reacción in vitro es capaz de generar más de un millón de clones de inserción de transposón.

Características
El sistema de generación de mutaciones (MGS Kit) y el sistema Stop Generation (STOP Kit) fueron desarrollados para el análisis funcional de proteínas. Estas nuevas herramientas de transposón permiten la creación de bibliotecas saturadas de proteínas mutadas en una sola reacción con menos tiempo de intervención que cualquier otro método. La ubicación de la inserción de transposones en cada clon mutado se puede mapear mediante PCR o secuenciación. Con los kits MGS y STOP, miles de clones mutados están listos para estudios de expresión en solo de 2 a 3 días.

El MGS Kit contiene el conjunto completo de reactivos para la mutagénesis de exploración enlazadora basada en transposón de cualquier proteína objetivo. Los MGS Entranceposons están diseñados para realizar cambios sutiles en la estructura de una proteína objetivo mediante la inserción de 15 bp en el marco de los linkers en todo el gen objetivo correspondiente. Esta inserción en el marco permite la conservación de secuencias de flujo descendente.

Los Entranceposons del STOPKit contienen codones de parada traslacionales en los tres marcos de lectura dentro de la porción terminal de la secuencia de transposones. La modificación patentada del sistema Stop Generation permite generar una biblioteca de deleción C-terminal saturada a partir de prácticamente cualquier proteína objetivo con una adición máxima de tres aminoácidos.

Aspectos destacados

• Eficiente - Crea bibliotecas de inserción saturadas para secuenciación y análisis de proteínas en una sola reacción
• Rápido: Reduce el tiempo de intervención en comparación con los métodos convencionales
• Aleatorio: Elimina la preferencia de sitio de destino o el punto de acceso directo de inserción

• Enzimas
• Receptores
• Proteínas estructurales, etc.
  El MGS Kit genera al azar quince inserciones in vitro de base par en cualquier ADN objetivo para:
• Generación rápida de cinco bibliotecas de inserción de aminoácidos en el marco de cualquier proteína para análisis funcionales
• Mutagénesis rápida y aleatoria de promotores clonados y otras regiones de ADN reguladoras
• Inserción aleatoria de un sitio de enzima de restricción Notl en cualquier clon de ADN objetivo

• Transposasa MuA (F-750):
• Transposasa MuA (0,22 μg/μl, 20 μl)
• Tampón de reacción 5X

• Transposasa MuA concentrada (1,1 μg/μl, 20 μl)
• Tampón de reacción 5X
• Tampón de almacenamiento MuA

• Transposasa MuA (0,22 μg/μl en tampón de almacenamiento MuA)
• Entranceposon (STOP-KanR) (100 ng/μl en tampón TE)
• Tampón de reacción 5X para la transposasa MuA
• DMSO al 100 %
• ADN objetivo de control (370 ng/μl en tampón TE)
• Primer MuEnd-2 (25 μm en dd agua)
• Primer SeqE (10 μm en dd agua)
• Primer SeqW (10 μm en dd agua)

• Transposasa MuA (0,22 μg/μl en tampón de almacenamiento MuA)
• Entranceposon (M1-CAMR) (100 ng/μl en tampón TE)
• Entranceposon (M1-KanR) (100 ng/μl en tampón TE)
• Tampón de reacción 5X para la transposasa MuA
• ADN objetivo de control (370 ng/μl en tampón TE)

Generación rápida de bibliotecas de inserción de cinco aminoácidos en el marco de cualquier proteína para análisis funcionales, mutagénesis rápida y aleatoria de promotores clonados y otras regiones de ADN reguladoras, inserción aleatoria de un sitio de enzimas de restricción de Notl en cualquier clon de ADN objetivo