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El kit utiliza transcriptasa inversa RevertAid, cuya actividad de ARNasa H es más baja en comparación con la transcriptasa inversa AMV. El inhibidor de ARNasa RiboLock recombinante que se suministra con el kit protege con eficacia el molde de ARN de la degradación. Es totalmente compatible con la reacción de transcripción inversa, puesto que mantiene la actividad a temperatura hasta 55 °C. El oligo(dT)18 se recuece de forma selectiva en la cola poli(A) del ARNm. Los primers hexámeros aleatorios no requieren la presencia de poli(A). Por lo tanto, pueden utilizarse para la transcripción de las regiones del extremo 5 del ARNm o para la síntesis del ADNc utilizando ARN sin cola poli(A); p. ej., micro ARN. Estos kits también permiten la utilización de cebadores específicos de genes. La primera cadena de ADNc puede emplearse directamente como plantilla en PCR (consulte el protocolo RT-PCR), en PCR en tiempo real o en síntesis de segunda cadena de ADNc (consulte el protocolo).
El kit de síntesis de ADNc de primera cadena Thermo Scientific RevertAid es un sistema completo para la síntesis eficaz de ADNc de primera cadena a partir de plantillas de ARN. El kit es adecuado para la síntesis de ADNc de hasta 13 kb. El inhibidor de ARNasa RiboLock que se suministra con el kit protege eficazmente las plantillas de ARN de la degradación. El kit de síntesis de ADNc de primera cadena RevertAid se suministra con primers hexaméricos aleatorios y oligo(dT)18. El primer oligo(dT)18 se recuece de forma selectiva con la cola poli(A) del ARNm. Los primers hexaméricos aleatorios no requieren la presencia de la cola poli(A), por lo que se pueden emplear para la transcripción de las regiones de extremo 5' del ARNm o la síntesis de especies de ARN que carecen de una cola poli(A) (p. ej., microARN). También pueden emplearse con el kit primers específicos de genes. Aspectos destacados • Primera cadena de ADNc completa de hasta 13 kb • Temperatura de reacción óptima de 42 °C • Kit completo: se incluyen todos los componentes de la reacción RT Aplicaciones • Síntesis de ADNc de primera cadena para RT-PCR y RT-qPCR • Construcción de bibliotecas de ADNc de longitud completa • Síntesis de ARN antidetección Incluye lo siguiente: El kit de síntesis de la primera cadena de ADNc RevertAid contiene una transcriptasa inversa RevertAid, un inhibidor de ARNasa RiboLock, un tampón de reacción 5X, una mezcla de dNTP, un cebador hexamérico aleatorio, un ARN de control GAPDH, 10 μm de un cebador de avance GAPDH, 10 μm de un cebador de retroceso GAPDH y agua sin nucleasas. El kit de RT RevertAid contiene una transcriptasa inversa RevertAid, un inhibidor de ARNasa RiboLock, un tampón de reacción 5X, una mezcla de dNTP, un cebador hexamérico aleatorio y agua sin nucleasas.
Peligroso: No >Control de calidad: el kit se prueba funcionalmente en RT-PCR utilizando 100 fg de ARN de control GAPDH y cebadores de control GAPDH que generaron un producto de 496 pb visible en gel de agarosa después de la tinción con bromuro de etidio. > Condiciones de almacenamiento: 20 °C
Síntesis de la primera cadena del ADNc para RT-PCR y real time RT-PCR (1, 2); construcción de bibliotecas de ADNc; creación de sondas para hibridación; síntesis de ARNa.
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