Invitrogen™ Superoxide Dismutase (SOD) Colorimetric Activity Kit

Descripción

El kit de la actividad de la superóxido dismutasa (para uso exclusivo en investigación) es un ensayo de actividad colorimétrica diseñado para la detección y cuantificación de la actividad de la superóxido dismutasa en suero, plasma, células, tejidos y lisados de eritrocitos.

Este kit completo y listo para usar incluye placas transparentes de 96 pocillos, patrón de superóxido dismutasa (1 unidad/vial), sustrato de superóxido dismutasa y otros componentes para realizar el ensayo. Para utilizar este kit se necesita un lector de microplacas de 96 pocillos capaz de leer la densidad óptica a 450 nm.

Características de rendimiento
• Tipo de ensayo: kit de actividad colorimétrica
• Tipos de muestras: suero, plasma, células, tejidos y lisados eritrocitos
• Sensibilidad: 0,044 U/ml
• Intervalo de curva estándar: 0,06–4 U/ml
• Reactividad: especies independientes

Antecedentes
Las especies de oxígeno de corta duración y altamente reactiva (ROS) como el superóxido, el radical hidroxilo y el peróxido de hidrógeno se generan continuamente in vivo. En estado de reposo, el equilibrio entre antioxidantes y oxidantes basta para prevenir la interrupción de las funciones fisiológicas normales; sin embargo, el aumento del nivel de oxidantes y la disminución del nivel de antioxidantes pueden interrumpir este equilibrio y generar gran cantidad de especies reactivas del oxígeno (ROS). Los niveles celulares de ROS se controlan mediante enzimas antioxidantes y moléculas antioxidantes de pequeño tamaño. Las principales enzimas antioxidantes, las superóxido dismutasas (SOD), incluida la superóxido dismutasa cobre-zinc (Cu/ZnSOD, SOD1), la superóxido dismutasa de manganeso (MnSOD, SOD2) y la superóxido dismutasa extracelular (EC-SOD, SOD3), desempeñan un papel fundamental en la depuración de los superóxidos.

La disminución de la actividad de las SOD da lugar a un nivel elevado de superóxidos, que a su vez conduce a una disminución en el número de peroxinitritas y a una mayor concentración de esta. La principal SOD intracelular es una proteína 32-kD de cobre y zinc que contiene homodímero (Cu/Zn SOD). La SOD mitocondrial (MnSOD) es un homotetrámero de 93-kD que contiene manganeso que se sintetiza en el citoplasma y se translocaliza a la matriz interna de las mitocondrias. Este ensayo está validado para usarse en muestras de suero y orina. Las superóxido dismutasas son enzimas antiguas que, habitualmente, se comportan de manera similar frente al sustrato colorimétrico. Este ensayo se emplea para medir la actividad de las SOD a partir de una amplia gama de fuentes.

Principio del ensayo
El kit de actividad de superóxido dismutasa está diseñado para medir cuantitativamente la actividad de las SOD en una variedad de muestras. El ensayo mide todos los tipos de actividad de SOD, incluidos los tipos Cu/Zn, Mn y FeSOD. Se proporciona un estándar de SOD de eritrocitos bovinos para generar una curva estándar para el ensayo; todas las muestras deben leerse en la curva estándar. Las muestras se diluyen en nuestro diluyente de muestras especialmente coloreado y se añaden a los pocillos. Se añade el sustrato y, después, el reactivo de xantina oxidasa. Se incuba a temperatura ambiente durante 20 minutos. La xantina oxidasa genera superóxido en presencia de oxígeno, lo que convierte un sustrato incoloro en el reactivo de detección en un producto de color amarillo. El producto coloreado se lee a 450 nm. El aumento de los niveles de SOD en las muestras provoca una disminución de la concentración de superóxido y una reducción del producto amarillo.

Definición de unidad DE SOD
una unidad de SOD se define como la cantidad de enzima que causa la mitad de la inhibición máxima de la reducción de 1,5 mM de tetrazolio azul Nitro en presencia de riboflavina a 25 °C y pH 7,8.