Melford Proteinase K

Del álbum Tritirachium. Serina proteasa para la inactivación proteolítica de nucleasas durante el aislamiento de ADN y ARN.

Descripción

La proteinasa K es una serina proteasa altamente reactiva que muestra la capacidad de digerir proteínas nativas, inactivando así enzimas como la DNasa y la RNasa sin recurrir a un proceso de desnaturalización. Es la proteinasa más potente entre todas las proteinasas caracterizadas hasta ahora. Se escinde en el enlace peptídico adyacente al grupo de ácido carboxílico de los aminoácidos alifáticos, aromáticos o hidrófobos.

La proteinasa K recombinante se utiliza en el aislamiento o preparación de ácidos nucleicos de alto peso molecular. Es altamente puro, tiene una actividad específica más alta y es más estable a temperatura ambiente en comparación con la proteinasa K nativa.

La proteinasa K recombinante se expresa a partir de la levadura Pichia pastoris con un gen clonado que codifica la proteasa endolítica Engyodontium album (Tritirachium album) .

Aplicaciones

• La proteinasa K recombinante es extremadamente eficaz en proteínas nativas y, por lo tanto, puede utilizarse para inactivar rápidamente nucleasas endógenas como las ARNasas y las ADNasas. Esta propiedad hace que la proteinasa K sea particularmente adecuada para el aislamiento de ARN y ADN nativos de tejidos o líneas celulares.
• Se utiliza para el análisis de estructuras de membrana mediante la modificación de proteínas y glicoproteínas en las superficies celulares.
• Particularmente adecuado para aislar ácidos nucleicos para reacciones de amplificación.
• Promueve la lisis celular activando un factor autolítico bacteriano.
• Se utiliza para eliminar restos celulares durante la preparación de colonias y para tratar secciones de tejido para garantizar una infiltración eficiente de la sonda durante la hibridación in situ.

Recomendaciones de reconstitución:

Para la preparación de la solución madre, sugerimos reconstituir el polvo liofilizado en un tampón (20 mM Tris, 1 mM CaCl ₂ , 2 % glicerol, pH 7,4).

El calcio es importante para la termoestabilidad de la proteinasa K y el valor del pH es fundamental para una alta solubilidad.

El uso de glicerol crioprotector a una concentración final del 50% en la solución madre es para prevenir daños por congelación/descongelación. La proteinasa K retuvo el 99% de su actividad después de 12 ciclos de congelación/descongelación en la solución madre. Evite la congelación y descongelación repetidas para evitar la precipitación de la proteína si no se agrega glicerol.

La solución de proteinasa K permanece activa en un amplio rango de pH (4,0-12,5, a menudo utilizada en un rango de 7,5-9,0) y en un amplio rango de temperatura de 25 °C a 75 °C. La solución permanece estéril y estable durante al menos 12 meses a 4 °C.

Precaución: El polvo liofilizado de proteinasa K recombinante no es estéril. La solución madre se puede preparar como una solución de 20-40 mg/ml en tampón Tris-HCl 20 mM, esterilizada utilizando un tampón de 0,22 μfiltro m. La solución madre se puede almacenar en glicerol al 50% en alícuotas en un amplio rango de temperatura de 24 °C a -80 °C.

Para una filtración estéril, recomendamos utilizar membranas de PES o PVDF con baja unión a proteínas.

Composición (SIN ADITIVOS):

• ≥90% Proteína Proteinasa K, test de biuret.
• Excipientes: Sacarosa 8%
• ADN y ARN libres
• Libre de endotoxinas

Presupuesto:

• Estable y activo en un amplio rango de pH de 4 a 12. La actividad máxima está en el rango de pH de 7,5 a 12,0.
• Activo con SDS, urea y EDTA. La temperatura más activa es de 65 °C.
• Inactivado por fluorofosfatos de diisopropilo (DFP) y fluoruro de fenil metanosulfonilo (PMSF).
• Purificación: Cromatografía de afinidad de níquel seguida de cromatografía de intercambio iónico y diálisis.
• CE: 3.4.21.64