Gibco™ Kit de clonación pOptiVEC™-TOPO™ TA Cloning™

Descripción

• El kit OptiCHO™ Express está diseñado para un crecimiento y transfección eficientes de células de ovario de hámster chino (CHO) DG44 con deficiencia de dihidrofolato reductasa (DHFR) en cultivo de suspensión.
• El kit proporciona un protocolo de flujo de trabajo completo, así como los componentes necesarios para la transfección eficaz de células DHFR DG44 en un entorno sin suero y el posterior desarrollo de líneas celulares estables, que incluye:
• Vector pOptiVEC™-TOPO™: un vector de clonación bicistrónica que contiene un gen DHFR para el desarrollo estable de líneas celulares en células CHO-DG44 (Figura 1); el vector está adaptado a TOPO™ y permite la clonación de un producto de PCR que contiene su gen de interés con una eficacia de >85 %
• Reactivo de transfección FreeStyle™ MAX: un reactivo de transfección sin componentes de origen animal que ofrece altas eficiencias de transfección y resultados uniformes
• Medio CD OptiCHO™: un medio sin proteínas definido químicamente (sin hipoxantina o timidina) diseñado específicamente para el cultivo celular de suspensión de alta densidad de células CHO-DG44 recombinantes y el rendimiento de proteínas secretadas
• Medio CD DG44: un medio químicamente definido y sin proteínas complementado con hipoxantina y timidina para favorecer un crecimiento óptimo de las células DG44 en el cultivo de suspensión
• Células DG44: preadaptadas al medio CD DG44 y seleccionadas para un crecimiento celular y una eficacia de transfección superiores
• Además, el kit OptiCHO™ Express proporciona GIBCO™ OptiPRO™ SFM para mejorar la formación del complejo de lípidos de ADN, L-glutamina (se suministra por separado para aumentar la estabilidad de los medios) y Pluronic™ F-68 para controlar las fuerzas de cizalla en los cultivos de suspensión.
• Almacenamiento: Almacene Pluronic™ F-68 de 15 °C a 30 °C. Almacene el medio CD DG44, el medio OptiPRO™ SFM, el medio CD OptiCHO™ y el reactivo de transfección FreeStyle™ MAX de 2 °C a 8 °C en la oscuridad. Almacene la L-glutamina, el vector pOptiVEC™-TOPO™, el cebador de secuenciación de avance CMV y el cebador de secuenciación inversa EMCV IRES de -5 °C a -20 °C. Almacene las células de E. coli químicamente competentes One Shot™ TOP10 a -80 °C. Almacenar las células DG44 en nitrógeno líquido.