Thermo Scientific™ Papaína inmovilizada (resina de agarosa)

Descripción

La papaína inmovilizada Thermo Scientific™ Pierce es una cisteína-endopeptidasa (papaína) que se ha inmovilizado en resina de agarosa en gránulos para permitir la generación y purificación de fragmentos de Fab a partir de anticuerpos.

La papaína es una cisteína-endopeptidasa no específica aislada del látex de papaya que se utiliza en una amplia variedad de aplicaciones. Cuando las moléculas IgG se incuban con papaína en presencia de cisteína, se dividen uno o más enlaces peptídicos en la región bisagra, lo que da lugar a tres fragmentos de tamaño similar: dos fragmentos Fab y un fragmento FC. Los fragmentos Fc pueden separarse de los fragmentos Fab mediante el uso de proteína A inmovilizada o mediante cromatografías de intercambio iónico. El fragmento Fc de 50 kilodalton se utiliza a menudo para determinar la especificidad de los receptores Fc sin interferencia de la unión del antígeno. Los fragmentos Fab son útiles en estudios inmunohistoquímicos porque penetran en el tejido mejor que la IgG intacta. Además, se evitan posibles uniones no específicas de los receptores Fc al utilizar solo la porción Fab de la inmunoglobulina. La papaína puede usarse para generar fragmentos F(ab')2. Para preparar fragmentos F(ab')2, la papaína se activa primero con 10 mM de cisteína, que luego se elimina mediante filtración en gel. Si no hay cisteína durante la digestión con papaína, se pueden generar fragmentos de F(ab')2. Estos fragmentos son a menudo poco coherentes, por lo que la reproducibilidad puede suponer un problema. La papaína inmovilizada puede sustituirse por papaína libre en casi cualquier aplicación y ofrece una serie de ventajas, como que prácticamente elimina la autolisis, elimina la contaminación de las muestras con la proteasa y permite controlar la digestión mediante la eliminación de la papaína o el control del flujo de la muestra sobre una columna de papaína inmovilizada. La papaína inmovilizada también es más estable frente a la desnaturalización inducida por calor, lo que hace que la actividad se mantenga durante más tiempo.

Características destacadas:

• Soporte: Agarosa granulada al 6% entrecruzada
• Actividad específica: De 16 a 40 unidades BAEE/ml de papaína antes de la carga
• Carga: 250 μg de papaína/ml de gel
• Forma: Pulpa en 50 % de glicerol, 0,1 M Na-acetato, pH 4,4, 0,05 % de azida sódica

Características adicionales:

• Nombre alternativo: Papaya peptidasa I
• Escinde de forma ligeramente inespecífica en residuos expuestos
• Fuente: Carica papaya latex Peso molecular: 23.000
• Tipo de proteasa: Cisteína proteasa
• Para la fragmentación de anticuerpos, se escinde en fragmentos Fab o F(ab')2
• Condiciones de reacción de pH 6 a 7, de 20 a 37 °C
• Inhibidores: metales pesados, carbonilos, NEM, p-cloromerculo-benzoato, E-64