Thermo Scientific™ Kit de aislamiento y biotinilación de proteínas de la superficie celular Pierce™

Descripción

Características del kit de aislamiento y biotinilación de proteínas de superficies celulares:
• Rendimiento mejorado: el kit y el protocolo se han rediseñado para mejorar el enriquecimiento y la extracción de proteínas biotiniladas de la membrana plasmática, al tiempo que se minimiza la contaminación por proteínas intracelulares
• Optimizado: el protocolo se ha actualizado para reducir el tiempo de procesamiento y el número de pasos, y las formulaciones de reactivos se han optimizado para mejorar el rendimiento
• Compatible: los reactivos se han verificado con líneas celulares adherentes y de suspensión, con instrucciones adicionales proporcionadas para la preparación de muestras para MS
• Aplicaciones validadas: los reactivos y los procedimientos son compatibles con aplicaciones de inmunotransferencia (Western blotting) y de MS

Este kit es fácil de usar y proporciona todos los componentes y procedimientos necesarios para el etiquetado óptimo y posterior aislamiento de proteínas de la superficie celular. Los tampones se suministran preformulados para producir resultados uniformes. Las células de mamíferos se etiquetan primero con sulfo-NHS-SS-biotina EZ-Link, un reactivo de biotinilación aminorreactiva que se puede escindir con tiol. Las células se lisan posteriormente y las proteínas etiquetadas se capturan con la agarosa NeutrAvidin. El ditiotreitol (DTT) se utiliza en la elución para reducir los enlaces de disulfuro en la etiqueta de biotina, lo que resulta en la liberación de las proteínas ligadas sin la etiqueta de biotina. Este kit contiene suficientes reactivos para ocho experimentos, que constan de dos placas de 15 cm confluentes al 85 - 95 % o cuatro matraces de 75 cm².

Las proteínas de la superficie celular representan un subconjunto clave de proteínas celulares y desempeñan un papel importante en la transducción de señales, la adhesión celular y el transporte de iones. Estas proteínas son difíciles de extraer y aislar de manera eficiente debido a sus múltiples dominios transmembranales. A menudo, los detergentes fuertes y las condiciones necesarias para una extracción eficiente dan lugar a la desnaturalización y la contaminación de las proteínas de la membrana plasmática después del aislamiento. Como alternativa, este kit utiliza sulfo-NHS-SS-biotina de la membrana impermeable y aminorreactiva para etiquetar eficazmente las proteínas de la superficie celular con lisinas accesibles. Las condiciones de lisis, captura, lavado y elución se han optimizado para conseguir un enriquecimiento y aislamiento eficaces, al tiempo que se minimiza la contaminación de las proteínas intracelulares.

El protocolo se ha optimizado para su uso con diversas líneas celulares de mamíferos, incluidas las células adherentes y en suspensión, y es útil para el análisis de expresión diferencial entre células tratadas y no tratadas o entre una o más líneas celulares. La selectividad y la eficiencia del aislamiento de proteínas de la superficie celular se han verificado mediante inmunotransferencia (Western blotting) y análisis LC-MS.