OPTIZYME™ AloI, Fisher BioReagents™

5'...^ ₇(N) G A A C (N)₆ T C C (N)_12-13^...3'
3'...^_12-13(N) C T T G (N)₆ A G G (N)₇ ^...5'

Suministrado con: Tampón 5 OPTIZYME 10X
Condiciones para el 100 % de actividad:

• 1 tampón OPTIZYME 5: 10 mM de Tris-HCl (pH 8,5 a 37 °C), 10 mM de MgCl₂, 100 mM de KCl y 0,1 mg/ml de BSA
• Incube a 30°C

• Tampón 1: 0 - 20 %
• Tampón 2: 0 - 20 %
• Tampón 3: 0 - 20 %
• Tampón 4: 20 - 50 %
• Tampón 5: 100 %

• 10 mm de Tris-HCl (pH de 7,4 a 25°C), 100 mm de KCl, 1 mm de DTT, 1 mm de EDTA, 0,2 mg/ml de BSA y 50 % (v/v) de glicerol

• La incubación a 37°C resulta en un 20 % de actividad.
• AloI produce cortes bicatenarios en ambos lados del punto de reconocimiento interrumpido. Su única característica es un punto de escisión degenerado en el extremo 3 de la secuencia de reconocimiento (a 12 o 13 nucleótidos de distancia).
• La presencia de S-adenosilmetionina en la mezcla de reacción produce una fragmentación incompleta con AloI.
• Una sobredigestión con 10 veces la cantidad recomendada de AloI puede provocar una actividad estrella (star activity).
• Alol puede permanecer asociada al ADN fragmentado, lo que puede provocar un desplazamiento de las bandas de ADN durante la electroforesis. Para evitar patrones atípicos de las bandas de ADN, use colorante de carga de ADN 6X & solución de SDS para la preparación de muestras o caliente el ADN digerido en presencia de SDS antes de la electroforesis.

• 5'...GAAC(N)₄Gm6A TCC...3'

• 5'...GAAC(N)₆TCm5CW GG...3'

• 5'...m5C GAAC(N)₆TCC...3'

• 5'...GAAC(N)₆TCm5C G...3'

• 5'...GAAm5C G(N)₅TCC...3'