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Kit de expresión de Pichia de varias copias

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Cantidad:
1 Kit
Förpackningsstorlek
cada uno
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Produktkod. Cantidad unitSize
17804890 1 Kit cada uno
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Beskrivning

El kit de expresión de Pichia de varias copias contiene los vectores pPIC3.5K, pPIC9K y pAO815 para la producción y selección de cepas de Pichia que contienen más de una copia del gen de interés.

  • El kit de expresión de Pichia de varias copias contiene los vectores pPIC3.5K, pPIC9K y pAO815 para la producción y selección de cepas de Pichia que contienen más de una copia del gen de interés
  • En muchos casos, el aumento del número de copias ha llevado a un aumento de los niveles de expresión
  • Estos vectores también están disponibles por separado

pPIC9K y pPIC3.5K

  • Los vectores pPIC9K y pPIC3.5K porta el gen resistente a la kanamicina que confiere resistencia al reactivo Geneticin™ en Pichia
  • La generación espontánea de múltiples eventos de inserción puede ser identificada por resistencia al aumento de los niveles de reactivo Geneticin™
  • Los transformantes de Pichia se seleccionan en un medio con deficiencia de histidina y se criban para determinar su nivel de resistencia al reactivo Geneticin™
  • La capacidad para crecer en altas concentraciones de Geneticin™ indica que hay múltiples copias del gen resistente a la kanamicina y del gen de interés integrados en el genoma
  • El vector pPIC9K dirige la secreción de proteínas expresadas mientras que las proteínas expresadas a partir de pPIC3.5K permanecen intracelulares.

pAO815

  • pAO815 es un vector de expresión Pichia diseñado para clonar múltiples copias de un gen en un solo vector
  • El vector contiene un sitio Bgl II en el proceso anterior del gen 5´ AOX1 y un sitio único BamH I en el proceso posterior de la señal de la terminación de la transcripción (TT) de 3´ AOX1
  • Es necesario realizar cuatro pasos para generar múltiples copias del gen de interés:
    • 1. El gen se clona en el sitio único EcoR I en el vector.
    • 2. La construcción se digiere con BamH I y Bgl II para liberar el «cassette de expresión» que contiene el promotor AOX1, el gen de interés y la TT de 3´ AOX1.
    • 3. Los concatémeros del cassette de expresión se generan por ligación in vitro.
    • 4. Las copias múltiples se insertan de nuevo en el vector pAO815 y se transforman en Pichia.
TRUSTED_SUSTAINABILITY

Specifikationer

Resistencia bacteriana a los antibióticos Ampicilina (AmpR), gentamicina (GmR)
Cepa bacteriana o de levadura KM71
Contenido y almacenamiento El kit de expresión Pichia de varias copias incluye 20 µg de cada uno de los vectores pPIC3.5K, pPIC9K y pAO815, cepas de Pichia pastoris GS115 (his4), KM71(arg4 his4 aox1::ARG4), cepa de control GS115 de albúmina, cepa de control GS115 β-gal, kit de transformación Spheroplast, 2 µg de cada cebador de secuenciación de 5´ AOX1, 3´ AOX1 y del factor-α. Los vectores pP1C9K, pPIC3.5K y pAO815 también están disponibles por separado.

Almacene los vectores y primers a -20 °C. Guarde las cepas a temperatura ambiente. Se garantiza la estabilidad de todos los componentes durante 6 meses si se almacenan correctamente.
Método de clonación Enzimas de restricción/MCS
Tipo de célula Células de levadura
Formato Kit
Promotor AOX1
Especie P. pastoris
Vector pPIC
Mecanismo de expresión Expresión basada en células
Sistema de expresión Levadura
Para utilizar con (aplicación) Expresión de proteínas
Tipo de producto Kit de expresión
Etiqueta de proteína Sin etiquetar
Cantidad 1 Kit
Agente de selección (eucariótico) Ampicilina (AmpR), gentamicina (GmR)
Visa mer Visa mindre

Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.

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