Molecular Probes™ Kit de ensayo MitoProbe™ JC-1

Descripción

El kit de ensayo MitoProbe™ JC-1 es un ensayo rápido y fiable que se utiliza para detectar cambios en las mitocondrias mediante citometría de flujo.

Consulte una guía de selección para todos los ensayos de apoptosis para citometría de flujo.

Selectivo a cambios mitocondriales
El colorante JC-1 que penetra en la membrana se emplea ampliamente en estudios de apoptosis para vigilar el estado mitocondrial. El tinte JC-1 muestra una acumulación dependiente del potencial en las mitocondrias, que se indica mediante un cambio de la emisión de fluorescencia de verde (∼ 529 nm) a rojo (∼ 590 nm). Por consiguiente, la despolarización mitocondrial se indica mediante una disminución en la intensidad de fluorescencia roja/verde. El cambio de color sensible al potencial se debe a la formación dependiente de la concentración de agregados J rojos fluorescentes.

A diferencia de otros tintes mitocondriales que se ven afectados por el potencial de la membrana plasmática, la proporción de fluorescencia de verde a rojo de JC-1 depende únicamente del potencial de membrana y no de otros factores, tales como el tamaño, la forma y la densidad mitocondrial, lo cual puede influir en las señales de fluorescencia de un único componente. El uso de la detección de la intensidad de la fluorescencia permite a los investigadores realizar mediciones comparativas del potencial de membrana y determinar el porcentaje de mitocondrias dentro de una población que responden a un estímulo aplicado.

Indicador de apoptosis temprana
Una característica distintiva de las primeras etapas de la muerte celular programada es la interrupción de la actividad de las mitocondrias. Esta interrupción del la actividad mitocondrial incluye cambios en el potencial de membrana y alteraciones en el potencial de oxidación-reducción de las mitocondrias. Se supone que los cambios en el potencial de membrana se deben a la apertura del poro de la transición de la permeabilidad mitocondrial (MPTP), lo que permite el paso de iones y moléculas pequeñas. El equilibrio de iones resultante lleva a su vez a la desvinculación de la cadena respiratoria y la liberación del citocromo C en el citosol.

Protocolo simple y optimizado
Uno de los mayores desafíos de trabajar con tintes de emisión doble como JC-1 es la compensación. El kit de ensayo MitoProbe™ JC-1 ofrece un interruptor del potencial de membrana, carbonilcianuro-m-clorofenilhidrazona (CCCP), para crear controles de compensación que permitan alcanzar una proporción compensada de la fluorescencia de verde a rojo. El protocolo de tinción es sencillo y claro: incubar las células con tinte JC-1 y, a continuación, analizar la señal fluorescente en los canales de FITC y PE de un láser de 488 nm.