Invitrogen™ MAGnify™ Chromatin Immunoprecipitation System

El ADN aislado está listo para su posterior análisis mediante métodos como ensayos basados en PCR o qPCR, o bien mediante secuenciación masiva de ADN en paralelo. La inmunoprecipitación de cromatina (ChIP) es una potente técnica que permite estudiar la asociación de ciertas proteínas con regiones específicas del genoma. Se cree que estas proteínas de unión a secuencias específicas de ADN desempeñan un papel fundamental en procesos celulares como la replicación, recombinación, reparación y segregación de ADN; la estabilidad cromosómica; la progresión del ciclo celular; y el silenciamiento epigenético. En un ensayo de ChIP estándar, se fija una célula mediante un tratamiento de formaldehído, se cizalla la cromatina y se inmunoprecipita mediante un anticuerpo altamente específico. A continuación, el investigador analiza el ADN para identificar las regiones genómicas donde las proteínas asociadas a la cromatina se unen a la cromatina in vivo. Cuando se utiliza el sistema MAGnify, se tratan las células o el tejido con formaldehído para generar entrecruzados proteína-proteína y proteína-ADN entre moléculas muy próximas al complejo de cromatina. A continuación, se lisan las células, se libera la cromatina de los núcleos y se cizalla mediante ultrasonidos para reducir el tamaño de fragmento medio de ADN a un intervalo de 200 a 500 bp para el análisis mediante PCR cuantitativa en tiempo real (qPCR) o de 100 a 300 bp para el análisis mediante secuenciación masiva de ADN en paralelo. Posteriormente, se inmunoprecipita y aísla la proteína de interés entrecruzada mediante un anticuerpo cualificado para ChIP específico conjugado en la proteína A/G de Dynabeads™. El entrecruzamiento de formaldehído se invierte mediante tratamiento térmico y se purifica el ADN asociado con esa proteína. De esta forma, el ADN estará listo para análisis posteriores, como las PCR de punto final o las PCR cuantitativas (qPCR), los análisis de genoma completo mediante el uso de promotor/microchips de embaldosado o la secuenciación de última generación. En el análisis de PCR/qPCR, los primers están diseñados para abarcar la secuencia de ADN deseada y los datos muestran si la proteína específica de interés se asocia in vivo a esa región del ADN.

• Sensible: obtenga resultados con cantidades de muestra inferiores a las necesarias en los flujos de trabajo de ChIP tradicionales
• Rápido: el protocolo se puede completar en un solo día, en comparación con los 2 a 3 días que tarda el ensayo de ChIP tradicional