Thermo Scientific™ LightShift™ EMSA Optimization and Control Kit

El kit incluye los reactivos para configurar y personalizar las reacciones de unión proteína-ADN, un conjunto de control de extractos de proteínas y ADN para probar el sistema del kit, un conjugado de estreptavidina y peroxidasa de rábano picante (HRP) estabilizado como sonda de cribaje para el objetivo de ADN etiquetado con biotina y un módulo de sustrato quimioluminiscente excepcionalmente sensible para la detección. El principio de la detección de EMSA LightShift™ es similar a la inmunotransferencia (Western Blotting). El ADN bicatenario etiquetado con extremos de biotina se incuba con un extracto nuclear o factor purificado y se realiza una electroforesis del mismo en gel natural. A continuación, el ADN se transfiere rápidamente (en 30 minutos) a una membrana de nailon positiva, se entrecruza con UV, se le aplica una sonda de conjugado de estreptavidina-HRP y se incuba con el sustrato. El protocolo, desde el etiquetado a los resultados, puede realizarse en un solo día. Para realizar el ensayo solo necesita un objetivo de ADN purificado con extremo etiquetado con biotina, el extracto de proteínas que desea probar, una membrana de nailon y equipos básicos de electroforesis. Los objetivos de ADN se pueden sintetizar con etiquetas 5' o 3' biotina o etiquetarse tras la síntesis con el kit de etiquetado de ADN con extremo de 3' biotina Thermo Scientific (n.º de referencia 89818). Los extractos de proteína celular completa, citosólicos o nucleares se pueden obtener con una serie de métodos, incluido el kit de reactivos de extracción citoplasmática y nuclear NE-PER Thermo Scientific (n.º de referencia 78833).

Características destacadas:

• Incluye el sistema de control de antígenos nucleares de Epstein-Barr (EBNA) para ayudar a los nuevos usuarios a desarrollar un ensayo de trabajo y a comprender los métodos que se utilizan para confirmar la especificidad de la interacción de unión.
• Excelente para la detección de proteínas de baja abundancia en extractos nucleares.
• Sensibilidad que supera los métodos radiactivos y de digoxigenina.
• Compatible con las condiciones de unión establecidas previamente para las interacciones ADN-proteína populares.