Invitrogen™ LanthaScreen™ TR-FRET PPAR gamma Coactivator Assay Kit, goat

Este kit contiene anticuerpo TB-Anti-GST de cabra; los otros componentes del kit son los mismos que los del kit A15126:

el kit de ensayo de coactivador gamma LanthaScreen™ TR-FRET PPAR proporciona un método sensible y robusto para la detección de alto rendimiento de los potenciales ligandos gamma PPAR como agonistas o antagonistas del reclutamiento de coactivadores dependientes de ligandos. El kit utiliza un anticuerpo anti-GST marcado con terbio (Tb), un péptido coactivador marcado con fluoresceína y un receptor gamma activado por proliferadores de peroxisoma (PPAR gamma-LBD) que se etiqueta con glutatión-S-transferasa (GST) en un formato de ensayo homogéneo de mezcla y lectura.

Modo agonista:
para ejecutar el ensayo de coactivador LanthaScreen™ TR-FRET del receptor gamma activado por proliferadores de peroxisoma en modo agonista (para identificar compuestos agonistas), se añade PPAR gamma-LBD a los compuestos de ensayo de ligando, seguido de la adición de una mezcla de péptido coactivador de fluoresceína y anticuerpo Tb-anti-GST. Después de un periodo de incubación a temperatura ambiente, se calcula la relación de emisión TR-FRET 520:495 y se utiliza para determinar la EC50 a partir de una curva dosis-respuesta del compuesto. Basado en la biología de la interacción del péptido gamma-coactivador PPAR, este ligando EC50 es un valor compuesto que representa la cantidad de ligando necesaria para unirse al receptor, efectuar un cambio conformacional y reclutar el péptido coactivador (figura 1).

Modo antagonista:
cuando se ejecuta el ensayo de coactivador LanthaScreen™ TR-FRET del receptor gamma activado por proliferadores de peroxisoma en modo antagonista (para identificar compuestos antagonistas), se añade PPAR gamma-LBD a los compuestos de ensayo de ligando, seguido de la adición de una mezcla de péptido coactivador de fluoresceína agonista y anticuerpo Tb-anti-GST. La concentración de agonista utilizada en este modo es la concentración de EC80 determinada por la primera ejecución del ensayo en modo agonista (figura 2).

Contenido y almacenamiento:
El kit de ensayo de coactivador LanthaScreen™ TR-FRET PPARγ contiene proteína PPAR gamma-LBD (GST), péptido coactivador TRAP220/DRIP-2 marcado con fluorescencia, anticuerpo Tb-anti-GST y tampones. Almacene los componentes como se indica en el protocolo del ensayo (-80 °C, -20 °C o +4 °C).