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Invitrogen™ LanthaScreen™ TR-FRET Androgen Receptor Coactivator Assay Kit
Descripción
™ El kit de ensayo del coactivador del receptor de andrógenos LanthaScreen TR-FRET proporciona un método sensible y robusto para la detección de alto rendimiento de los ligandos potenciales del receptor de andrógenos (AR) como agonistas del reclutamiento del coactivador o antagonistas del reclutamiento del coactivador agonista-dependiente. Tanto en el modo agonista como en el antagonista, el ensayo homogéneo de mezcla y lectura utiliza un dominio de unión al ligando de AR de rata (AR-LBD) marcado con hexahistidina y glutatión-S-transferasa (GST) (también disponible por separado), un anticuerpo anti-GST marcado con terbio (Tb) y un péptido coactivador marcado con fluoresceína.
Modo agonista
Cuando el ensayo de coactivador del receptor de andrógenos LanthaScreen TR-FRET se ejecuta en modo agonista (para identificar compuestos agonistas), se añade AR-LBD a los compuestos de ensayo de ligando, seguido de la adición de una mezcla de péptido coactivador de fluoresceína y anticuerpo Tb-anti-GST. Después de la incubación a temperatura ambiente, se calcula la relación de emisión TR-FRET 520:495 nm y se utiliza para determinar la EC50 a partir de una curva de respuesta de dosis del compuesto. Este ligando EC50 es un valor compuesto que representa la cantidad de ligando necesaria para unirse al receptor, efectuar un cambio conformacional y reclutar péptido coactivador (ver figura).
Modo antagonista
Cuando el ensayo de coactivador del receptor de andrógenos LanthaScreen TR-FRET se ejecuta en modo antagonista (para identificar compuestos antagonistas), se agrega AR-LBD a los compuestos de prueba de ligando, seguido de la adición de una mezcla de agonista DHT, péptido coactivador de fluoresceína y anticuerpo Tb-anti-GST. La concentración de agonista DHT utilizada en este modo es la concentración de EC80 determinada por la primera ejecución del ensayo en modo agonista. En la figura siguiente se muestra un ejemplo de los datos producidos en el modo antagonista.
Modo agonista
Cuando el ensayo de coactivador del receptor de andrógenos LanthaScreen TR-FRET se ejecuta en modo agonista (para identificar compuestos agonistas), se añade AR-LBD a los compuestos de ensayo de ligando, seguido de la adición de una mezcla de péptido coactivador de fluoresceína y anticuerpo Tb-anti-GST. Después de la incubación a temperatura ambiente, se calcula la relación de emisión TR-FRET 520:495 nm y se utiliza para determinar la EC50 a partir de una curva de respuesta de dosis del compuesto. Este ligando EC50 es un valor compuesto que representa la cantidad de ligando necesaria para unirse al receptor, efectuar un cambio conformacional y reclutar péptido coactivador (ver figura).
Modo antagonista
Cuando el ensayo de coactivador del receptor de andrógenos LanthaScreen TR-FRET se ejecuta en modo antagonista (para identificar compuestos antagonistas), se agrega AR-LBD a los compuestos de prueba de ligando, seguido de la adición de una mezcla de agonista DHT, péptido coactivador de fluoresceína y anticuerpo Tb-anti-GST. La concentración de agonista DHT utilizada en este modo es la concentración de EC80 determinada por la primera ejecución del ensayo en modo agonista. En la figura siguiente se muestra un ejemplo de los datos producidos en el modo antagonista.
Especificaciones
Especificaciones
| Cantidad | 800 ensayos de 20 μL |
| Contenido y almacenamiento | 1 tubo de proteína recombinante de dominio de unión a ligando AR (almacenar a una temperatura entre -68 y -85 °C) 1 tubo de péptido (almacenar a una temperatura entre -5 y -30 °C) 2 frascos de tampón TR-FRET (almacenar a una temperatura entre -5 y -30 °C) 1 tubo de TB-Anti-GST Ab (almacenar a una temperatura ente -5 y -30 °C) 1 tubo de DTT (almacenar a una temperatura entre -5 y -30 °C) |
| Línea de productos | LanthaScreen |
| Para utilizar con (aplicación) | Ensayo de interacción de cofactores, ensayo de receptores nucleares |
| Ligando | AR |
| Tipo de producto | Kit de ensayo de coactivadores del receptor de andrógenos TR-FRET |
| No. of Assays | 800 x 20 μL assays |
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Título del producto
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