Invitrogen™ TOPO™ TA Cloning™ Kit for Sequencing, with pCR™4-TOPO™ Vector, One Shot™ TOP10 Chemically Competent E. coli, and PureLink™ Quick Plasmid Miniprep Kit

Descripción

Los kits TOPO™ TA Cloning™ para secuenciación utilizan el vector pCR™4-TOPO™ TA con sitios de primers de secuenciación especialmente diseñados que devuelven más secuencia de inserto y menos secuencia de vector de cada reacción. Estos kits incluyen todo lo necesario para clonar y seleccionar vectores recombinantes que contienen los fragmentos de PCR que elija.

• Obtenga más secuencia: permite obtener más secuencia de inserto y menos secuencia de vector cuando se utilizan los primers de secuenciación estándar
• Rápido y fácil: de PCR a clones en solo 3 pasos y en tan solo 5 minutos de manipulación
• Eficaz: obtenga hasta un 95 % de clones con el inserto adecuado
• Probado: rendimiento fiable durante más de una década con más de 4000 citas

Descripción general de los kits TOPO™ TA Cloning™ para secuenciación

• VECTOR: vector pCR™4-TOPO™ TA: vector de clonación optimizado para obtener mejores resultados de secuenciación
• MÉTODO DE CLONACIÓN: TOPO™ TA Cloning : ligación en 5 minutos con base de Topoisomerasa I de productos PCR con salientes 3´A (amplificados con Taq) al vector
• CÉLULAS COMPETENTES: Varias opciones: seleccione entre kits con células generales, de alta eficacia, con resistencia T1 bacteriófaga o competentes de rápido crecimiento

Vector pCR™4-TOPO™ TA: optimizado para secuenciación
Se ha eliminado gran parte del sitio de clonación múltiple del vector pCR™4-TOPO™ TA para acortar la distancia entre los sitios de primers de secuenciación y el sitio del inserto a tan solo 33 bp. De este modo, las reacciones de secuenciación proporcionan menos secuencia de vector y más secuencia de inserto. El vector pCR™4-TOPO™ TA tiene sitios para 4 primers de secuenciación comunes: M13 directo, M13 inverso, T7 y T3. Los kits incluyen una alícuota de cada uno de ellos.

Selección y manipulación de clones pcR™4-TOPO™ TA
El vector pCR™4-TOPO™ TA contiene marcadores de resistencia de ampicilina y kanamicina y la fusión de genes LacZα-ccdB para selección positiva y detección azul/blanco. El sitio de clonación múltiple minimizado del vector aún incluye sitios EcoRI de flanqueo para la escisión simplificada de productos de PCR clonados y un único sitio Sse8387I para la generación de eliminaciones anidadas antes de la secuenciación. Los promotores T7 y T3 están también presentes para la transcripción in vitro.

Clonación simplificada basada en TOPO™
Mediante la tecnología de clonación TOPO™, no es necesario emplear primers de PCR que contengan secuencias específicas, procedimientos posteriores a la PCR, preparación de vectores u otros pasos de manipulación de ADN que consumen mucho tiempo. Solo tiene que añadir su reacción de PCR directamente al vector cargado con la topoisomerasa suministrado, incubar 5 minutos y transformar con las células competentes de E. coli proporcionadas.

Clonación eficiente
Con hasta un 95 % de los clones transportado al inserto deseado, podrá filtrar menos clones, lo que le ayudará a ahorrar tiempo y dinero. El vector pCR™4-TOPO™ TA utilizado en este kit se suministra con salientes 3´T para una ligación eficaz de los productos PCR amplificados con Taq con salientes 3´A.

El estándar en clonación
En el campo de la clonación, la tecnología de clonación TOPO™ ha sido un socio fiable durante más de diez años para miles de científicos. Rápida, fácil de usar y eficiente, la clonación TOPO™ se ha aplicado a muchos vectores distintos para multitud de aplicaciones. El kit TOPO™ TA Cloning™ para secuenciación puede adquirirse con diversas células competentes que ofrecen distintas ventajas dependiendo de sus necesidades.