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Invitrogen™ Sistema de síntesis de primera cadena SuperScript™ III
Descripción
Includes
Oligo(dT)20 (50 μm), 50 μl; hexámeros aleatorios (50 ng/μl), 250 μl; tampón RT 10X, 1 ml; 0,1 m de DTT, 250 μl; cloruro magnésico de 25 mm, 500 μl; 10 mm de mezcla de dNTP, 250 μl; RT SuperScript III (200 U/μl), 50 μl; RNaseOUT (40 U/μl), 100 μl; ARNasa H de E. coli (2 U/μl), 50 μl; agua tratada con DEPC, 1,2 ml; ARN de HeLa total (10 ng/μl), 20 μl; cebador de control sentido (10 μm), 25 μl; cebador de control antisentido (10 μm), 25 μl
Con este sistema, pueden detectarse objetivos de ARN de 100 bp a >12 kb. La cantidad de material de partida puede variar entre 1 pg y 5 μg de ARN total. La transcriptasa inversa SuperScript III es una versión de la transcriptasa inversa (RT) del virus de la leucemia murina Moloney (M-MLV) que se ha diseñado para reducir la actividad de la ARNasa H y proporcionar mayor estabilidad térmica. La enzima se utiliza para sintetizar ADNc en un intervalo de temperatura de 42 °C a 55 °C, lo que proporciona una mayor especificidad, mayor producción de ADNc y más cantidad de producto de cadena completa que otras transcriptasas inversas. Como la RT SuperScript III no se ve significativamente inhibida por el ARN de transferencia y ribosomal, se puede emplear para sintetizar la primera cadena de ADNc a partir de una preparación de ARN total.
- Uso del sistema de primera cadena SuperScript III: la síntesis de ADNc se realiza en el primer paso mediante ARN total o ARN seleccionado poli(A)+ cebado con oligo(dT), cebadores aleatorios o un cebador específico de genes.
- En el segundo paso, la PCR se realiza en un tubo independiente con cebadores específicos para el gen de interés.
- Para la reacción de la PCR, recomendamos una de las siguientes ADN polimerasas:
- La ADN polimerasa Platinum Taq proporciona condiciones automáticas de incio en caliente para aumentar la especificidad hasta 4 kb.
- La ADN polimerasa Platinum Taq de alta fidelidad proporciona un mayor rendimiento y una alta fidelidad para objetivos de hasta 15 kb.
- La ADN polimerasa Pfx Platinum proporciona la máxima fidelidad para los objetivos, hasta 12 kb.
- Temperatura óptima de reacción: 50 °C
- Suficiente para 50 reacciones según un tamaño de reacción de 20 μl.
PCR y PCR en tiempo real, transcripción inversa
Información de órdenes
Condición de envío: Hielo seco
Especificaciones
Especificaciones
| Contenido y almacenamiento | El sistema de síntesis de primera cadena SuperScript™ III para RT-PCR se suministra con lo siguiente: • Oligo(dT)20 (50 μm), 50 μl • Hexámeros aleatorios (50 ng/μl), 250 μl • de tampón RT 10X, 1 ml • 0,1 m de DTT, 250 μl • 25 mm de cloruro magnésico, 500 μl • 10 mm de mezcla de dNTP, 250 μl • RT SuperScript III (200 U/μl), 50 μl • RNaseOUT (40 U/μl), 100 μl • ARNasa H de E. coli (2 U/μl), 50 μl • Agua tratada con DEPC, 1,2 ml • ARN HeLa total (10 ng/μl), 20 μl • Cebador de control sentido (10 μm), 25 μl • Cebador de control antisentido (10 μm), 25 μl Suficiente para 50 reacciones según un tamaño de reacción de 20 μl. Almacenar a – 20 °C. |
| Formato | Kit |
| GC-Rich PCR Performance | Alto |
| Velocidad de reacción | 50 min |
| Técnica | Transcripción reversa |
| Temperatura óptima de reacción | 50 °C |
| Cantidad | 50 rxns |
| Transcriptasa inversa | SuperScript III |
| Condiciones de envío | Hielo seco |
| Para utilizar con (aplicación) | Real Time PCR (qPCR), RT-PCR |
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Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
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