Invitrogen™ Sistema de síntesis de primera cadena SuperScript™ para RT-PCR

El sistema de síntesis de primera cadena SuperScript™ para RT-PCR está optimizado para la síntesis de ADN complementario (ADNc) de primera cadena a partir de ARN total o poli (A)+ purificado. El sistema puede emplearse con una cantidad tan ínfima como 1 ng o tan elevada como 5 µg de ARN total. Después de la síntesis, el ADNc se puede amplificar con cebadores específicos mediante PCR sin extracciones orgánicas intermedias ni precipitaciones de etanol. En conjunción con la PCR, el sistema puede utilizarse para detectar la presencia de mensajes raros, cuantificar la cantidad de ARNm específico a partir de un pequeño número de células o clonar ADNc específicos sin construir toda una biblioteca de ADNc. El sistema es flexible y permite el uso de cualquier enzima de PCR. Se puede combinar con ADN polimerasa Taq AccuPrime™ o ADN polimerasa Taq Platinum™ para lograr una PCR de mayor especificidad, o bien con ADN polimerasa Pfx AccuPrime™ para aplicaciones de clonación de alta fidelidad.

RT SuperScript II
La reacción de síntesis de la primera cadena de ADNc se cataliza mediante transcriptasa inversa (RT) SuperScript™ II. Esta enzima se ha diseñado para reducir la actividad de ARNasa H que degrada el ARNm durante la reacción de la primera cadena, lo que se traduce en una mayor síntesis de ADNc de longitud completa y un mayor rendimiento de la primera cadena de ADNc que el obtenido con las RT de ARNasa H+. Como la RT SuperScript™ II no se ve significativamente inhibida por el ARN de transferencia y ribosomal, se puede emplear de forma eficaz para sintetizar la primera cadena de ADNc a partir de una preparación de ARN total. La enzima presenta un aumento de la estabilidad térmica y puede utilizarse a temperaturas de hasta 50 °C.

Uso del sistema de síntesis de primera cadena SuperScript™ para RT-PCR
Este sistema se ha optimizado para sintetizar la primera cadena de ADNc a partir de cantidades variables de material de partida. La concentración de RT de SuperScript™ II ha bajado y el inhibidor de ARNasa recombinante RNaseOUT™ se ha añadido al sistema como parte de este proceso de optimización. Además, se han modificado las condiciones de reacción para aumentar aún más la sensibilidad del sistema. Mediante este kit, puede sintetizar la primera cadena de ADNc mediante ARN total o ARN seleccionado mediante poli(A)+ cebado con oligo(dT), cebadores aleatorios o un primer específico del gen. A continuación, se realiza la PCR en un tubo aparte mediante cebadores específicos para el gen de interés.