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Invitrogen™ Sistema de síntesis de primera cadena SuperScript™ para RT-PCR
Código de producto. 10684803
Marca: Invitrogen™ 11904018
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Descripción
Includes
50 μl de Oligo(dT)12-18 (0,5 μg/μl) 250 μl de hexámeros aleatorios (50 ng/μl) 1 ml del tampón RT 10X 500 μl de cloruro magnésico de 25 mm 250 μl de DTT de 0,1 m 250 μl de mezcla de dNTP de 10 mm 50 μl de RT SuperScript II (50 U/μl) 100 μl de RNaseOUT (40 U/μl) 50 μl de ARNasa H de E. coli (2 U/μl) 1,2 ml de agua tratada con DEPC 15 μl de ARN de control (50 ng/μl) 20 μl del cebador de control A (10 μm) 20 μl del cebador de control B (10 μm)
El sistema de síntesis de primera cadena SuperScript para RT-PCR puede emplearse con una cantidad tan ínfima como 1 ng o tan elevada como 5 μg de ARN total. Después de la síntesis, el ADNc se puede amplificar con cebadores específicos mediante PCR sin extracciones orgánicas intermedias ni precipitaciones de etanol. En conjunción con la PCR, el sistema puede utilizarse para detectar la presencia de mensajes raros, cuantificar la cantidad de ARNm específico a partir de un pequeño número de células o clonar ADNc específicos sin construir toda una biblioteca de ADNc. El sistema es flexible y permite el uso de cualquier enzima de PCR. Se puede combinar con ADN polimerasa Taq AccuPrime™ o ADN polimerasa Taq Platinum para lograr una PCR de mayor especificidad, o bien con ADN polimerasa Pfx AccuPrime para aplicaciones de clonación de alta fidelidad.
- RT SuperScript II La reacción de síntesis de la primera cadena de ADNc se cataliza mediante la transcriptasa inversa (RT) SuperScript II. Esta enzima se ha diseñado para reducir la actividad de ARNasa H que degrada el ARNm durante la reacción de la primera cadena, lo que se traduce en una mayor síntesis de ADNc de longitud completa y un mayor rendimiento de la primera cadena de ADNc que el obtenido con las RT de ARNasa H+.
- Como la RT SuperScript II no se ve significativamente inhibida por el ARN de transferencia y ribosomal, se puede emplear de forma eficaz para sintetizar la primera cadena de ADNc a partir de una preparación de ARN total.
- La enzima presenta un aumento de la estabilidad térmica y puede utilizarse a temperaturas de hasta 50 °C.
Uso del sistema de síntesis de primera cadena SuperScript para RT-PCR Este sistema se ha optimizado para sintetizar la primera cadena de ADNc a partir de cantidades variables de material de partida. La concentración de RT de SuperScript II ha bajado y el inhibidor de ARNasa recombinante RNaseOUT se ha añadido al sistema como parte de este proceso de optimización. Además, se han modificado las condiciones de reacción para aumentar aún más la sensibilidad del sistema. Mediante este kit, se sintetiza la primera cadena de ADNc con ARN total o ARN seleccionado mediante poli(A)+ cebado con oligo(dT), cebadores aleatorios o un cebador específico del gen. La PCR con cebadores específicos del gen de interés se realiza en un tubo separado.
PCR y PCR en tiempo real, transcripción inversa
Información de órdenes
Condición de envío: Hielo húmedo
Especificaciones
Especificaciones
| Contenido y almacenamiento | • Oligo(dT)12-18, 50 μl (0,5 μg/μl) |
| Formato | Kit |
| GC-Rich PCR Performance | Alto |
| Velocidad de reacción | 50 min |
| Técnica | Transcripción reversa |
| Temperatura óptima de reacción | 42 °C |
| Cebador | Cebadores aleatorios, cebadores oligo dT |
| Cantidad | 50 rxns |
| Transcriptasa inversa | SuperScript II |
| Condiciones de envío | Hielo húmedo |
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Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
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