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Invitrogen™ GeneRacer™ Kit with AMV RT and TOPO TA Cloning™ Kit for Sequencing
Descripción
El kit GeneRacer está disponible con la transcriptasa inversa (RT) SuperScript III para obtener una amplificación mejorada del extremo 5' de longitud completa del ARNm largo y complejo. La parte de ARNasa H de RT SuperScript III se ha mutado para evitar la disociación de ARNm durante la síntesis de ADNc. Esto aumenta el tamaño y la producción de ADNc. La RT SuperScript III es más termoestable que las RT naturales. Esto permite la transcripción inversa a altas temperaturas, lo que relaja la estructura secundaria de plantillas complejas y permite que la síntesis de ADNc se complete.
- Generar ADNc de transcritos de al menos 10 kb de longitud
- Obtener el extremo 5 de longitud completa de transcritos raros en menos de 30 copias por célula
- Clonar los extremos 5 y 3 de longitud completa para construir la secuencia de ADNc completa
- Garantiza que solo se amplifican los transcritos que contienen extremos de ADNc de longitud completa (1,2)
- El avanzado protocolo comienza en el nivel de ARN y se centra específicamente solo en ARNm con caperuza 5
- En los pasos siguientes, se retira la caperuza y se sustituye con el oligonucleótido de ARN GeneRacer
- Durante la transcripción inversa, la secuencia de oligonucleótido de ARN GeneRacer se incorpora al ADNc
- Solo el ADNc que se haya transcrito de manera inversa completamente contendrá esta secuencia conocida
- A continuación se realiza una PCR 5 RACE mediante el uso del cebador de 5 GeneRacer específico de la secuencia de oligonucleótido de ARN GeneRacer y un cebador específico del gen
- El resultado es ADN amplificado que contiene la secuencia de ADNc de 5 de longitud completa
- Con el fin de demostrar la capacidad del kit GeneRacer para capturar el ADNc de 5 de longitud completa, se han amplificado los extremos 5 de genes con sitios conocidos de inicio de transcripciones
- Comenzando con ARN total y siguiendo el protocolo de GeneRacer, se amplificaron tanto los transcritos largos (10 kb) como los mensajes raros presentes en el 0,01 %, o 30 copias por célula
Clonación, PCR y PCR en tiempo real, transcripción inversa, bibliotecas y construcción de bibliotecas de ADNc
Especificaciones
Especificaciones
| Cepa bacteriana o de levadura | TOP10 |
| Método de clonación | TOPO TA |
| Contenido y almacenamiento | Cada kit GeneRacer™ contiene la caja GeneRacer™, una caja de RT, columnas S.N.A.P.™ y un kit de clonación TOPO™. El GeneRacer™ y la caja RT contienen suficientes reactivos para cinco reacciones de ADNc más una reacción de control y cebadores para 50 reacciones de PCR. En la caja de GeneRacer™ se incluyen las enzimas CIP, TAP, ligasa de ARN T4 y sus tampones, el oligonucleótido de ARN GeneRacer™ (predividido y liofilizado), cebadores GeneRacer™ y cebadores Nested, inhibidor de ribonucleasa recombinante RNaseOUT™, fenol/cloroformo, glucógeno de mejillón, agua esterilizada y controles. Almacenar a – 20 °C. La caja de RT SuperScript™ III incluye RT SuperScript™ III, tampón de primera cadena 5X, DTT, ARNasa H, cebadores aleatorios, cebador de oligo(dT) GeneRacer™ y mezlca dNTP. Almacenar a – 20 °C. La caja de RT AMV clonada incluye RT AMV clonada, tampones de primera cadena 5X, DTT, ARNasa H, cebadores aleatorios, cebador de oligo(dT) GeneRacer™ y mezlca dNTP. Almacenar a - 80 °C. Una bolsa separada contiene diez columnas de purificación de gel S.N.A.P.™ para productos de PCR purificadores de gel. Almacenar a temperatura ambiente. El kit de clonación TOPO™ de 10 reacciones para secuenciación contiene dos cajas. Almacene la caja de clonación TOPO™ a -20 °C. Almacene la caja de E. coli competente a -70 °C. Se garantiza la estabilidad de todos los reactivos durante 6 meses si se almacenan correctamente. |
| Formato | Kit |
| Para utilizar con (aplicación) | Transcripción inversa |
| Incluye | Cada kit GeneRacer contiene la caja GeneRacer, una caja RT, columnas S.N.A.P. y un kit de clonación TOPO. El GeneRacer y la caja RT contienen suficientes reactivos para cinco reacciones de ADNc más una reacción de control y cebadores para 50 reacciones de PCR. En la caja de GeneRacer se incluyen las enzimas CIP, TAP, ligasa de ARN T4 y sus tampones, el oligonucleótido de ARN GeneRNA (predividido y liofilizado), cebadores GeneRacer y cebadores Nested, inhibidor de ribonucleasa recombinante RNaseOUT, fenol/cloroformo, glucógeno de mejillón, agua esterilizada y controles. Almacenar a -20 °C. La caja de RT SuperScript III incluye RT SuperScript III, tampón de primera cadena 5X, DTT, ARNasa H, cebadores aleatorios, cebador de oligo(dT) GeneRacer y mezcla dNTP. Almacenar a -20 °C. La caja de RT AMV clonada incluye RT AMV clonada, tampones de primera cadena 5X, DTT, ARNasa H, cebadores aleatorios, cebador de oligo(dT) GeneRacer y mezlca dNTP. |
| Línea de productos | GeneRacer, TA Cloning, TOPO |
| Tipo de producto | Kit de clonación |
| Cantidad | 1 Kit |
| Vector | pCR4-TOPO TA |
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
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