Invitrogen™ BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi Expression Vector Kit with EmGFP

El vector pcDNA™6.2-GW/EmGFP-miR incluido en el kit de vectores de expresión de ARNi miR Pol II BLOCK-iT con proteína fluorescente verde esmeralda está diseñado para expresar miARN artificiales que están diseñados para tener el 100 % de homología con la secuencia objetivo y darán lugar a la escisión específica. Este vector incluye secuencias de flancos y bucles de un miARN endógeno que dirige la escisión del miARN manipulado a partir de una transcripción Pol II más larga (pre-miARN). Con el galardonado diseñador de ARNi BLOCK-iT de Invitrogen, más del 70 % de las construcciones producen más de un 70 % de reducción. La expresión Pol II de miARN manipulados permite:

• Fuerte expresión del promotor temprano inmediato de CMV, con la opción de utilizar promotores específicos de tejidos u otros regulados a través de la recombinación MultiSite Gateway™
• Expresión cocistrónica de un indicador de proteína fluorescente verde esmeralda (EmGFP) en el vector pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR, que da como resultado una correlación muy fuerte de la expresión de la EmGFP con la actividad de reducción del miARN
• Compatibilidad con muchos de los vectores de destino Gateway (DEST) de Invitrogen para la expresión de genes; incluyendo vectores lentivirales para la transducción estable de tipos de células primarias, con y sin división, el sistema FLP-in™ para la integración cromosómica de un solo sitio y construcciones alternativas de fusión de informador
• Expresión de más de un miARN diseñado en la misma transcripción, que permite la reducción de múltiples genes simultáneamente y la generación de fenotipos sintéticos

Cómo funciona
Para altos niveles de expresión de la secuencia ARNi miR, el vector pcDNA6.2-GW/miR incluye el promotor de CMV. Simplemente introduzca un número de acceso RefSeq o una secuencia de nucleótidos en el diseñador de ARNi en línea gratuito BLOCK-iT RNAi Designer y el software diseñará miARN optimizados que tienen un 100 % de homología con el objetivo de interés. Clone el miARN en el vector usando un protocolo de ligadura rápida y transfecte para la expresión inmediata del miARN. El miARN expresado es procesado por la maquinaria celular endógena en el núcleo (incluyendo Drosha) y luego transportado al citoplasma donde es procesado adicionalmente por Dicer. El miARN completamente procesado se incorpora entonces al RISC donde funciona como un ARNip y tiene como resultado la escisión del ARNm objetivo.
Para una variedad de opciones de expresión, el casete de miARN que contiene EmGFP, las regiones de flanqueo de miR y un miARN homólogo al objetivo de interés, se pueden mover fácilmente a una variedad de vectores DEST. Esto ocurre a través de reacciones de recombinación Gateway en las que el casete de miARN se transfiere a un vector pDONR™ (reacción BP) y luego a un vector DEST (reacción LR) de elección.

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