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Invitrogen™ Sistema de expresión de ARNi lentiviral BLOCK-iT™ Pol II miR
Descripción
Amplía las posibles aplicaciones de ARNi más allá de las de otros sistemas retrovirales tradicionales (Naldini, 1998). El sistema de expresión de ARNi lentiviral BLOCK-iT Pol II miR incluye:
o Un kit de vectores de expresión de ARNi BLOCK-iT Pol II miR para la producción de un clon de expresión que contiene un oligonucleótido bicatenario que codifica una secuencia de pre-miARN para la expresión en células de mamíferos. El vector de expresión de ARNi BLOCK-iT Pol II miR (pcDNA™6.2-GW/miR) proporciona una forma rápida y eficaz de clonar dúplex de oligonucleótidos bc que codifican una secuencia de diana de miARN deseada en un vector que contiene un promotor de Pol II (CMV) para su uso en análisis de ARNi. El vector de expresión de ARNi BLOCK-iT Pol II miR está diseñado específicamente para permitir la expresión de secuencias de miARN y contener secuencias de flanqueo miR específicas que permiten el procesamiento adecuado del miARN.
o El vector pDONR™ 221 sirve para transferir el casete de expresión de pre-miARN al plásmido de expresión lentiviral mediante tecnología Gateway™. La tecnología Gateway es un método de clonación universal que aprovecha las propiedades de recombinación específicas del sitio del bacteriófago lambda (Landy, 1989) para proporcionar una forma rápida y altamente eficaz de mover su secuencia de ADN de interés a múltiples sistemas vectoriales.
o Un vector de destino pLenti6/V5-DEST en el que se transfiere el casete de pre-miARN del clon de expresión mediante la tecnología Gateway. Este plásmido de expresión contiene elementos que permiten el envasado de la construcción en viriones y el marcador de resistencia a la blasticidina para la selección de líneas celulares transducidas de forma estable.
o Mezclas de enzimas Gateway BP y LR Clonase™ II que facilitan la transferencia del casete de expresión pre-miARN desde el vector de expresión al vector de destino
pLenti6/V5-DEST.
o Componentes del sistema lentiviral ViraPower para la producción de un lentivirus incompetente para la replicación que expresa de forma estable el miARN de interés en las células de mamíferos con y sin división. La tecnología lentiviral ViraPower facilita la entrega in vitro o in vivo de un gen o ARN objetivo para células de mamíferos con y sin división mediante un lentivirus incompetente para la replicación. Basado en el sistema lentikat™ desarrollado por Cell Genesys (Dull et al., 1998), la tecnología lentiviral ViraPower posee características que mejoran su bioseguridad al tiempo que permite una expresión de alto nivel en una gama más amplia de tipos de células que los sistemas retrovirales tradicionales.
Clonación, clonación Gateway, ARNhc y miARN lentiviral, ARNi, ARNi, investigación de epigenética y ARN no codificante, ARNi basado en virus
Especificaciones
Especificaciones
| Tipo de producto | Kit de vectores de expresión de ARNi |
| Contenido y almacenamiento | El sistema de expresión de ARNi lentiviral BLOCK-iT™ Poll II miR contiene el kit de vectores de expresión de ARNi miR BLOCK-iT™ Pol IIque contiene dos cajas. La caja de clonación contiene pcDNA™6.2-GW/miR linealizado, tampón de recocido (10), ligasa de DNA T4, tampón de ligación de DNA (5), oligonucleótido de control lacZ, plásmido de control lacZ, plásmido de control negativo, agua sin ADNasa/ARNasa y cebadores de secuenciación directa e inversa. Almacene los vectores, tampones, oligos de control y plásmidos, agua y primers de secuenciación a -20 °C. La caja One Shot™ contiene reactivos de transformación que incluyen 21 alícuotas de 50 µl de E. coli químicamente competente TOP10 One Shot™, medio S.O.C. y un plasmídico de control superhelicoidal pUC19. Almacenar estos reactivos de transformación a -80 °C. Se garantiza la estabilidad de todos los reactivos durante 6 meses si se almacenan correctamente. El sistema de expresión de ARNi lentiviral BLOCK-iT™ Poll II miR también incluye todos los reactivos necesarios para la clonación Gateway™ en el sistema de expresión lentiviral, incluyendo: vector pLenti6/V5-DEST, control pLenti6-V5/GW-lacZ, pDONR™221, kit de soporte Bsd lentiviral ViraPower™ (mezcla de envase ViraPower™, reactivo de transfección Lipofectamine™ 2000 y blasticidina), línea celular 293FT, E. coli químicamente competente One Shot™ Stbl3™, E. coli químicamente competente One Shot™ TOP10 y mezclas de enzimas Gateway™ LR y BP Clonase™ II. Almacene el reactivo Lipofectamine™ 2000 a +4 °C (no lo congele). Almacene los vectores, la mezcla de envase ViraPower™, la blasticidina, y ambas mezclas de enzimas Clonase™ II a - 20 °C. Almacene las células competentes a - 80 °C. Almacene la línea celular 293FT en nitrógeno líquido. Se garantiza la estabilidad de todos los reactivos durante 6 meses si se almacenan correctamente. |
| Método de clonación | Gateway™ |
| Sistema constitutivo o inducible | Constitutivo |
| Tipo de entrega | Lentivírico |
| Tipo de RNAi | miARN |
| Agente de selección (eucariótico) | Blasticidina |
| Vector | pLenti |
| Promotor | CMV |
| Línea de productos | BLOCK-iT, Gateway |
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Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
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