Invitrogen™ Sistema de expresión de ARNi lentiviral BLOCK-iT™ Pol II miR con EmGFP

Amplía las posibles aplicaciones de ARNi más allá de las de otros sistemas retrovirales tradicionales (Naldini, 1998). El sistema de expresión de ARNi miR lentiviral Pol II BLOCK-iT con EmGFP incluye:
o Un kit de vectores de expresión de ARNi BLOCK-iT Pol II miR para la producción de un clon de expresión que contiene un oligonucleótido bicatenario que codifica una secuencia de pre-miARN para la expresión en células de mamíferos. El vector de expresión ARNi - miR Pol II BLOCK-iT (pcDNA™6.2-GW/EmGFP-miR) proporciona una manera rápida y eficiente de clonar los dúplex de ds oligo que codifican una secuencia diana deseada de miARN en un vector que contiene un promotor Pol II (CMV) para su uso en el análisis de ARNi. El vector de expresión ARNi miR Pol II BLOCK-iT está diseñado específicamente para permitir la expresión de secuencias de miARN y contener secuencias específicas de miR que flanquean y permiten el procesamiento adecuado del miARN.
o Expresión cocistrónica de un indicador de proteína fluorescente verde esmeralda (EmGFP) en el vector pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR, que da como resultado una correlación muy fuerte de la expresión de la EmGFP con la actividad de reducción del miARN
o El vector pDONR™221 para transferir el casete de expresión de pre-miARN al plásmido de expresión lentiviral mediante tecnología Gateway™. La tecnología Gateway es un método de clonación universal que aprovecha las propiedades de recombinación específicas del sitio del bacteriófago lambda (Landy, 1989) para proporcionar una forma rápida y altamente eficaz de mover su secuencia de ADN de interés a múltiples sistemas vectoriales.
o Un vector de destino pLenti6/V5-DEST en el que se transfiere el casete de pre-miARN del clon de expresión mediante la tecnología Gateway. Este plásmido de expresión contiene elementos que permiten el envasado de la construcción en viriones y el marcador de resistencia a la blasticidina para la selección de líneas celulares transducidas de forma estable.
o Mezclas de enzimas BP y LR Clonase™ II Gateway facilitan la transferencia del casete de expresión premiARN del vector de expresión al vector de destino pLenti6/V5-DEST.
o Componentes del sistema lentiviral ViraPower para la producción de un lentivirus incompetente en la replicación que expresa de manera estable el miARN de interés tanto en las células de mamíferos que se dividen como en las que no se dividen. La tecnología lentiviral ViraPower facilita la administración altamente eficiente, in vitro o in vivo de un gen o ARN diana a células de mamíferos que se dividen y no se dividen mediante un lentivirus incompetente en la replicación. Basado en el sistema de lentikat™ desarrollado por Cell Genesys (Dull et al., 1998), la tecnología lentiviral ViraPower posee características que mejoran su bioseguridad, permitiendo al mismo tiempo la expresión de alto nivel en una gama más amplia de tipos celulares que los sistemas retrovirales tradicionales.

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