Invitrogen™ Glutathione Colorimetric Detection Kit

El kit de detección de glutatión (para uso exclusivo en investigación) es un ensayo colorimétrico diseñado para la detección y cuantificación del glutatión en muestras de sangre completa, suero, plasma, eritrocitos, orina, lisados celulares y tejidos.

Este kit completo y listo para usar incluye placas transparentes de 96 pocillos, estándar de glutatión, tampón de ensayo y otros componentes para realizar el ensayo. Para utilizar este kit se necesita un lector de microplacas de 96 pocillos capaz de leer la absorción óptica de 405 a 412 nm.

Características de rendimiento
• Tipo de ensayo: kit de detección colorimétrica
• Tipos de muestras: sangre completa, suero, plasma, eritrocitos, orina, lisados celulares y tejidos
• Sensibilidad: 0,634 μM
• Intervalo de curva estándar: 0,78–25 μM
• Reactividad: independiente de la especie

Antecedentes
El glutatión (GSH) es la concentración más alta de tiol no proteico en células de mamíferos y está presente en concentraciones de 0,5 a 10 mm. El GSH desempeña un papel clave en muchos procesos biológicos, incluida la síntesis de proteínas y ADN, el transporte de aminoácidos y la protección de las células frente a la oxidación. La enzima glutatión peroxidasa (GP) minimiza los niveles celulares de peróxido de hidrógeno nocivo mediante el uso del GSH como reductor. El dímero de GSH oxidado, GSSG, se forma a partir de GSH y peróxido mediante la reacción de la GP. El hecho de que el potente inductor del NF-κB, el tetradecanoílo forbol acetato, aumente los niveles intracelulares de GSSG y la relación GSSG/GSH, sugiere que el GSSG desempeña un papel importante en la cascada de señales de activación del NF-κB. La glutatión S-transferasa (GST) es un importante grupo de enzimas que cataliza la adición nucleofílica de GSH a los electrófilos. Están codificados por 5 familias de genes: 4 codifican la GST citosólica y uno codifica la forma microsomal de la GST.

Principio del ensayo
El kit de detección colorimétrica de glutatión está diseñado para medir cuantitativamente el glutatión (GSH) y el glutatión oxidado (GSSG) presente en una variedad de muestras. No se requiere separación ni lavado. Se proporciona un estándar de GSSG para generar una curva estándar para el ensayo y todas las muestras deben leerse en la curva estándar. El kit utiliza un sustrato colorimétrico que reacciona con el grupo de tiol libre del GSH para producir un producto con mucho color. Los reactivos suministrados están en solución, por lo que deberá llevarse a cabo una dilución sencilla para usarlos en el ensayo. Si se utiliza 2-vinilpiridina (no incluida) para bloquear cualquier GSH libre en la muestra, se puede determinar el glutatión oxidado (GSSG). Las muestras que no hayan sido tratadas con 2-vinilpiridina devolverán los niveles totales de GSH. La concentración de GSH libre en la muestra se calcula a partir de la diferencia entre el GSH total determinado y el GSH generado a partir del glutatión oxidado en las muestras tratadas con 2-vinilpiridina. La concentración de GSH puede determinarse como una lectura de punto final del color desarrollado a 405 nm o midiendo la velocidad de desarrollo del color a 405 nm.